वाइल्ड टाक डीएनए पोलिमरेज
Taq DNA पोलिमरेज थर्मस एक्वाटिकस YT-1 बाट थर्मोस्टेबल DNA पोलिमरेज हो, जसमा 5′→3′ पोलिमरेज गतिविधि र 5' फ्ल्याप एन्डोन्यूक्लिज गतिविधि हुन्छ।
अवयवहरू
| कम्पोनेन्ट | HC1010A-०१ | HC1010A-०२ | HC1010A-०३ | HC1010A-04 |
| 10× Taq बफर | २×१ एमएल | 2 × 10 एमएल | 2 × 50 एमएल | ५×२०० एमएल |
| Taq DNA पोलिमरेज (5 U/μL) | ०.१ एमएल | १ एमएल | ५ एमएल | ५ × १० एमएल |
भण्डारण अवस्था
ढुवानी 0°C अन्तर्गत र -25°C~-15°C मा भण्डारण गर्नुहोस्।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइलाई 75 डिग्री सेल्सियसमा 30 मिनेटमा एसिड अघुलनशील पदार्थमा 15 एनएमओएल डीएनटीपी समावेश गर्ने इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिएको छ।
गुणस्तर नियन्त्रण
1.प्रोटीन शुद्धता परख (SDS-PAGE):Taq DNA पोलिमरेज को शुद्धता SDS-PAGE विश्लेषण द्वारा निर्धारित ≥95% थियो।
2.Endonuclease गतिविधि:37 ℃ मा 16 घण्टाको लागि 1 μg λDNA भएको Taq DNA पोलिमरेजको न्यूनतम 5 U को परिणामले निर्धारण गरे अनुसार कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
3.Exonuclease गतिविधि:1 μg λ -Hind Ⅲ डाइजेस्ट DNA 37 ℃ मा 16 घण्टाको लागि कम्तिमा 5 U को Taq DNA पोलिमरेजले निर्धारण गरे अनुसार कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
4.Nickase गतिविधि:1 μg pBR322 DNA भएको Taq DNA पोलिमरेजको न्यूनतम 5 U को 16 घण्टाको लागि 37°C मा नतिजा निर्धारण गरिए अनुसार कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
5.RNase गतिविधि:1.6 μg MS2 RNA को साथ 37 डिग्री सेल्सियसमा 16 घण्टाको लागि न्यूनतम 5 U को Taq DNA पोलिमरेजले निर्धारण गरे अनुसार कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
6.ई कोलाईDNA:Taq DNA पोलिमरेजको 5 U E. coli 16S rRNA लोकसका लागि विशेष प्राइमरहरू सहित TaqMan qPCR प्रयोग गरी E. coli genomic DNA को उपस्थितिको लागि जाँच गरिन्छ।ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए प्रदूषण ≤1 प्रतिलिपि हो।
7.PCR प्रवर्धन (5.0 kb Lambda DNA)- PCR एम्प्लीफिकेशनको 25 चक्रका लागि Taq DNA पोलिमरेजको 5 इकाइहरू सहित 5 ng Lambda DNA भएको 50 μL प्रतिक्रियाले अपेक्षित 5.0 kb उत्पादनमा परिणाम दिन्छ।
प्रतिक्रिया सेटअप
| अवयवहरू | भोल्युम |
| टेम्प्लेट डीएनएa | वैकल्पिक |
| 10 μM फर्वार्ड प्राइमर | १ μL |
| 10 μM रिभर्स प्राइमर | १ μL |
| dNTP मिक्स (10mm प्रत्येक) | १ μL |
| 10×Taq बफर | ५ μL |
| Taq DNA पोलिमरेजb | ०.२५ μL |
| न्यूक्लिज-मुक्त पानी | 50 μL सम्म |
नोट:
1) विभिन्न टेम्प्लेटहरूको इष्टतम प्रतिक्रिया एकाग्रता फरक छ।निम्न तालिकाले 50 μL प्रतिक्रिया प्रणालीको सिफारिस गरिएको टेम्प्लेट प्रयोग देखाउँछ।
| DNA | रकम |
| जीनोमिक | 1 ng-1 μg |
| प्लाज्मिड वा भाइरल | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNA Polymerase को इष्टतम एकाग्रता विशेष अनुप्रयोगहरूमा 0.25 μL ~ 1 μL बाट दायरा हुन सक्छ।
प्रतिक्रियाकार्यक्रम
| चरण | तापक्रम(°C) | समय | साइकलहरू |
| प्रारम्भिक विकृतीकरणa | 95 ℃ | ५ मिनेट | - |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | १५-३० सेकेन्ड | 30-35 साइकल |
| एनिलिङb | ६० ℃ | १५ सेकेन्ड | |
| विस्तार | 72 ℃ | 1kb/मिनेट | |
| अन्तिम विस्तार | 72 ℃ | ५ मिनेट | - |
नोट:
1) प्रारम्भिक विकृत अवस्था धेरै प्रवर्धन प्रतिक्रियाहरूको लागि उपयुक्त छ र टेम्प्लेट संरचनाको जटिलता अनुसार परिमार्जन गर्न सकिन्छ।यदि टेम्प्लेट संरचना जटिल छ भने, प्रारम्भिक विकृतीकरण प्रभाव सुधार गर्न पूर्व-डिनेच्युरेसन समय 5 - 10 मिनेटमा विस्तार गर्न सकिन्छ।
2) प्राइमरको Tm मान अनुसार annealing तापमान समायोजन गर्न आवश्यक छ, जुन सामान्यतया 3 ~ 5 ℃ मा प्राइमरको Tm मान भन्दा कम हुन्छ;जटिल टेम्प्लेटहरूको लागि, कुशल प्रवर्धन प्राप्त गर्न एनेलिङ तापमान समायोजन र विस्तार समय विस्तार गर्न आवश्यक छ।
