सुपरस्टार्ट qPCR प्रिमिक्स प्लस-UNG
बिरालो नम्बर: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG एक विशेष अभिकर्मक हो जुन रियल टाइम PCR गुणात्मक र मात्रात्मक प्रतिक्रियाहरूको लागि प्रोब-आधारित पत्ता लगाउन प्रयोग गरी डिजाइन गरिएको हो, विशेष गरी लाइओफिलाइजेशन प्रक्रियाहरूको लागि विकसित गरिएको।यसले एक उपन्यास हट-स्टार्ट इन्जाइम Hotstart Taq plus (DG) समावेश गर्दछ, जसमा यसको Taq इन्जाइम गतिविधि कोठाको तापक्रममा बन्द छ, प्रभावकारी रूपमा प्राइमर गैर-विशिष्ट एनेलिङ वा प्राइमर डाइमर गठनको कारणले गर्दा हुने गैर-विशिष्ट प्रवर्धनलाई कम तापक्रम अवस्थाहरूमा रोक्छ, यसरी सुधार हुन्छ। प्रवर्धन प्रतिक्रिया को विशिष्टता।यो अभिकर्मकले qPCR प्रतिक्रियाहरूको दक्षता र संवेदनशीलतालाई धेरै सुधार गर्दै द्रुत हट-स्टार्टिङ प्राप्त गर्नको लागि एक अनुकूलित qPCR विशिष्ट बफर र UNG/dUTP विरोधी प्रदुषण प्रणाली प्रयोग गर्दछ।यसले क्वान्टिटेशन क्षेत्रहरूको विस्तृत दायरामा राम्रो मानक वक्रहरू प्राप्त गर्न सक्छ र सही रूपमा परिमाण प्रदर्शन गर्न सक्छ, प्रभावकारी रूपमा अवशिष्ट PCR उत्पादनहरू वा एयरोसोल प्रदूषणको कारणले झूटा सकारात्मक प्रवर्धनलाई रोक्न सक्छ।यो अभिकर्मक एप्लाइड बायोसिस्टम्स, एपेन्डोर्फ, बायो-राड र रोचे आदि जस्ता निर्माताहरूबाट धेरै फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक PCR उपकरणहरूसँग उपयुक्त छ, र lyophilized रूपमा राम्रो स्थिरता प्रदर्शन गर्दछ।
अभिकर्मक संरचना
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+नि: शुल्क) (डीजी)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×लाइप्रोटेक्टेन्ट (वैकल्पिक)
भण्डारण सर्तहरू
-20 ℃ मा दीर्घकालीन भण्डारण;4 ℃ मा 3 महिना सम्म भण्डारण गर्न सकिन्छ।प्रयोग गर्नु अघि राम्रोसँग मिलाउनुहोस् रबारम्बार चिसो र पग्लनबाट बच्नुहोस्।
साइकल प्रोटोकल
| प्रक्रिया | अस्थायी। | समय | साइकल |
| पाचन | ५० ℃ | २ मिनेट | 1 |
| पोलिमरेज सक्रियता | 95 ℃ | १~५ मिनेट | 1 |
| डेन्चर | 95 ℃ | १० ~ २० सेकेन्ड | 40-50 |
| एनिलिङ र विस्तार | ५६ ~ ६४ ℃ | २०~६० सेकेन्ड | 40-50 |
qPCR तरल प्रतिक्रिया Syस्टेम तयारी
|
रचना |
25µL भोल्युम |
50µL भोल्युम |
अन्तिम एकाग्रता |
| 5×HotstartPremix प्लस-UNG(mg2+नि: शुल्क) (डीजी) | ५µL | १०µL | १× |
| 250mm MgCl2 | ०.४५µL | ०.९µL | ४.५ एमएम |
| 4 × लाइप्रोटेक्टेन्ट1 | ६.२५µL | 12.5µL | १× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स2 | १µL | २µL | १× |
| टेम्प्लेट डीएनए3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL सम्म | 50µL सम्म | —— |
1. प्राइमरहरूको लागि 0.2μM को अन्तिम एकाग्रताले सामान्यतया राम्रो परिणाम दिन्छ;जब प्रतिक्रिया कार्यसम्पादन कमजोर हुन्छ, आवश्यकता अनुसार 0.2-1μM को दायरा भित्र प्राइमर एकाग्रता समायोजन गर्नुहोस्।प्रोब एकाग्रता सामान्यतया 0.1-0.3μM को दायरा भित्र इष्टतम संयोजनहरू फेला पार्न ग्रेडियन्ट प्रयोगहरू मार्फत अनुकूलित गरिन्छ।
2. विभिन्न प्रकारका टेम्प्लेटहरूमा समावेश लक्ष्य जीनको प्रतिलिपि संख्या भिन्न हुन्छ;यदि आवश्यक छ भने, इष्टतम टेम्प्लेट थप रकम निर्धारण गर्न ढाँचा कमजोर गर्न सकिन्छ।
3. यो प्रणाली lyophilized गर्न सकिन्छ;जब ग्राहकहरूले फ्रिजिङ-ड्राइङ आवश्यकताहरू बिना यो प्रणाली प्रयोग गर्छन्, 4×lyoprotectant छनोट गरी थप्न सकिन्छ; यदि त्यहाँ फ्रिज-ड्राइभ उत्पादनहरू आवश्यक छन्, तरल अभिकर्मक चरण उत्पादन प्रदर्शन प्रमाणीकरणको क्रममा, यसले lyophilized प्रणाली कम्पोनेन्टहरूसँग स्थिरता सुनिश्चित गर्न 4×lyoprotectant थप्नु पर्छ। र प्रभावहरू।
प्रणाली प्रयोग गर्दाd फ्रिज-सुकाउने को लागी, तयार गर्नुहोस् प्रणाली as निम्न:
| रचना | 25µL प्रतिक्रिया प्रणाली |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+नि: शुल्क) (डीजी) | ५µL |
| 250mm MgCl2 | ०.४५µL |
| 4 × लाइप्रोटेक्टेन्ट | ६.२५µL |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स | १µL |
| ddH2O | 18~20µL सम्म |
* यदि फ्रिज-सुकाउने अन्य प्रणालीहरू आवश्यक छ भने, कृपया छुट्टै परामर्श गर्नुहोस्।
Lyophilization प्रक्रियाss
| प्रक्रिया | अस्थायी। | समय | अवस्था | दबाब |
| प्रि-फ्रिजिङ | ४ ℃ | ३० मिनेट | होल्ड गर्नुहोस् |
1 एटीएम |
| -50 ℃ | ६० मिनेट | चिसो | ||
| -50 ℃ | १८० मिनेट | होल्ड गर्नुहोस् | ||
| प्राथमिक सुकाउने | -30 ℃ | ६० मिनेट | तताउने |
परम वैक्यूम |
| -30 ℃ | ७० मिनेट | होल्ड गर्नुहोस् | ||
| माध्यमिक सुकाउने | २५ ℃ | ६० मिनेट | तताउने |
परम वैक्यूम |
| २५ ℃ | ३०० मिनेट | होल्ड गर्नुहोस् |
2. माथिको lyophilization प्रक्रिया सन्दर्भको लागि मात्र हो।विभिन्न उत्पादन प्रकारहरू र विभिन्न फ्रिज-ड्रायरहरू फरक प्यारामिटरहरू छन्, त्यसैले समायोजन वास्तविक अनुसार गर्न सकिन्छ।प्रयोगको समयमा सर्तहरू।
3. विभिन्न lyophilization प्रक्रिया lyophilized को विभिन्न ब्याच आकार को लागी उपयुक्त हुन सक्छउत्पादनहरू, ठूला-ठूला उत्पादनको लागि प्रयोग गर्दा पर्याप्त परीक्षण प्रमाणीकरण गर्नुपर्दछ।
Lyophilize प्रयोग गर्न निर्देशनd पाउडर
1. छोटकरीमा lyophilized पाउडर सेन्ट्रीफ्यूज;
2. lyophilized पाउडर मा न्यूक्लिक एसिड टेम्प्लेट थप्नुहोस् र 25µL सम्म पानी थप्नुहोस्;
3. सेन्ट्रीफ्यूगेशन द्वारा राम्रोसँग मिलाउनुहोस् र मेसिनमा चलाउनुहोस्।
गुणस्तर नियन्त्रण:
1. कार्यात्मक परीक्षण: qPCR को संवेदनशीलता, विशिष्टता, प्रजनन क्षमता।
2. कुनै एक्सोजेनस न्यूक्लिज गतिविधि छैन, एक्सोजेनस एन्डो/एक्सोन्युक्लिज प्रदूषण छैन।
प्राविधिक जानकारी:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG ले एक उपन्यास हट-स्टार्ट इन्जाइम प्रयोग गर्दछ जसले 1 ~ 5 मिनेट भित्र छिटो हट-स्टार्ट गर्न सक्षम बनाउँछ;विशेष बफर सूत्रीकरण मार्फत यो मल्टिप्लेक्स फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक PCR प्रतिक्रियाहरूको लागि उपयुक्त छ।
2. यसमा उच्च विशिष्टता छ जसले फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक PCR सीमा पत्ता लगाउने संवेदनशीलतालाई उल्लेखनीय रूपमा सुधार गर्दछ, एम्प्लीफिकेशन कर्भहरू सामान्यीकरण बनाउँछ, फ्लोरोसेन्स मूल्यले कम एकाग्रता टेम्प्लेटहरूमा स्पष्ट सुधार प्राप्त गर्दछ, उच्च संवेदनशीलता फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक PCR पत्ता लगाउने अभिकर्मकहरूको रूपमा उपयुक्त।
3. कम एनेलिङ तापक्रम वा 200bp भन्दा लामो टुक्रा भएका प्राइमरहरूको लागि, 3-चरण विधि सिफारिस गरिन्छ।
4. dUTP को उपयोग दक्षता र UNG इन्जाइमको संवेदनशीलता विभिन्न लक्षित जीनहरूको लागि भिन्न हुन्छ, यसैले यदि UNG प्रणाली प्रयोग गर्दा पत्ता लगाउने संवेदनशीलतामा कमी आउँछ भने, प्रतिक्रिया प्रणाली समायोजन र अनुकूलित हुनुपर्छ।यदि प्राविधिक समर्थन आवश्यक छ भने कृपया हाम्रो कम्पनीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्।
5. एम्प्लीफिकेशन अघि र पछि समर्पित क्षेत्रहरू र पिपेटहरू प्रयोग गर्नुहोस्, सञ्चालन गर्दा पन्जा लगाउनुहोस् र तिनीहरूलाई बारम्बार बदल्नुहोस्;PCR उत्पादनहरू द्वारा नमूनाहरूको प्रदूषण कम गर्न PCR पूरा भएपछि प्रतिक्रिया ट्यूब नखोल्नुहोस्।
