मल्टिप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR Premix-UNG
बिरालो नम्बर: HCB5145A
मल्टिप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR प्रोब किट (UDG Plus) टेम्पलेटको रूपमा RNA मा आधारित मल्टिप्लेक्स मात्रात्मक PCR किट हो।प्रयोगको प्रक्रियामा, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्सन र परिमाणात्मक पीसीआर एउटै ट्यूबमा गरिएको थियो, जसले प्रयोगात्मक सञ्चालनलाई सरल बनायो र प्रदूषणको जोखिम कम गर्यो।यस किटमा, पहिलो स्ट्र्यान्ड सीडीएनए कुशलतापूर्वक गर्मी प्रतिरोधी रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज द्वारा संश्लेषित गरिएको थियो र मात्रात्मक रूपमा हटस्टार्ट ट्याग डीएनए पोलिमरेजद्वारा विस्तार गरिएको थियो।किटमा मुख्यतया अप्टिमाइज गरिएको MP बफर, इन्जाइम मिक्स, इत्यादि हुन्छ। बफर समाधानले पहिले नै Mg समावेश गर्दछ2+र dNTP।थप रूपमा, गैर-विशिष्ट PCR प्रवर्द्धनलाई प्रभावकारी रूपमा रोक्न र बहु qPCR प्रतिक्रियाहरूको प्रवर्धन दक्षता सुधार गर्न सक्ने कारकहरू थपिएका छन्, जसले प्रवर्धन दक्षता सुनिश्चित गर्न सक्छ र बहुविध प्रवर्धन प्रतिक्रियाहरू पूरा गर्न सक्छ।dUTP/UDG प्रणालीलाई एरोसोल प्रदूषणको जोखिमलाई प्रभावकारी रूपमा रोक्न थप गरिएको थियो।
अवयवहरू
१. बफर
2. इन्जाइम मिक्स
निर्दिष्टीकरण
| हट स्टार्ट | बिल्ट-इन तातो सुरुवात |
| पत्ता लगाउने विधि | प्राइमर-प्रोब पत्ता लगाउने |
| पीसीआर विधि | एक चरण RT-qPCR |
| पोलिमरेज | Taq DNA पोलिमरेज |
| नमूना को प्रकार | DNA |
भण्डारण सर्तहरू
उत्पादन सुक्खा बरफ संग पठाइन्छ र 1 वर्ष को लागि -25~-15℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।यो बारम्बार बच्नुपर्छफ्रिज-थाउ।यो अलग बचत गर्न सिफारिस गरिएको छ।
निर्देशनहरू
1.प्रतिक्रिया प्रणाली
| अवयवहरू | भोल्युम (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| 2 × MP बफर | १२.५ | १× |
| इन्जाइम मिक्स | 1 | - |
| प्राइमर/प्रोब मिक्स (2.5 μM) | 3 | ०.३μM |
| टेम्प्लेट आरएनए | १-१० | - |
| RNase फ्री H2O | 25 सम्म | - |
नोट:
प्रयोग गर्नु अघि राम्रोसँग मिश्रण गर्न निश्चित हुनुहोस्, हिंसक कम्पनले गर्दा अत्यधिक बुलबुलेबाट बच्न।
aप्राइमर एकाग्रता: मल्टिप्लेक्स प्राइमर सहित प्राइमर मिक्स, परिस्थितिको आधारमा इष्टतम प्राइमर एकाग्रता 0.l र 1.0μM बीच हुन सक्छ।
bप्रोब एकाग्रता: मल्टिप्लेक्स प्रोब लेबलिङ भिन्नता फ्लोरोसेन्ट समूह सहित प्रोब मिक्स, स्थितिमा निर्भर गर्दै इष्टतम प्रोब एकाग्रता ०.०५ र ०.५μM बीच हुन सक्छ।
गटेम्प्लेट पातलो: qPCR अत्यधिक संवेदनशील छ र यो टेम्प्लेट पतला गर्न सिफारिस गरिएको छ।नियन्त्रण Ct मान 20 र 35 को बीचमा उपयुक्त छ।
dप्रणालीको तयारी: कृपया अल्ट्रा क्लिन वर्किंग टेबलमा तयारी गर्नुहोस्, र न्युक्लिज अवशेष बिना पाइप्टर र प्रतिक्रिया ट्यूब;यो फिल्टर तत्व संग बन्दुक टाउको प्रयोग गर्न सिफारिस गरिएको छ।क्रस प्रदूषण र एरोसोल प्रदूषणबाट बच्नुहोस्।
2. अनुकूलित साइकल चलाउनेप्रोटोकल
| साइकल कदम | अस्थायी। | समय | साइकलहरू |
| उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन | ५० ℃a | २० मिनेट | 1 |
| प्रारम्भिक-विच्छेदन | 95 ℃ | ५ मिनेट | 1 |
| प्रवर्धन प्रतिक्रिया | 95 ℃ | १५ सेकेन्ड |
४०-४५ |
| ६० ℃ b | ३० सेकेन्ड c |
नोट:
aउल्टो ट्रान्सक्रिप्शन: तापमानले 42 डिग्री सेल्सियस वा 50 डिग्री सेल्सियस चयन गर्न सक्छ।
bप्रवर्धन प्रतिक्रिया: तापमान डिजाइन गरिएको प्राइमरको Tm मान अनुसार समायोजित हुन्छ।
गप्रतिदीप्ति संकेत अधिग्रहण: उपकरण पुस्तिका को आवश्यकताहरु अनुसार प्रयोगात्मक प्रक्रिया सेट गर्नुहोस्।
नोटहरू
आफ्नो स्वास्थ्य र सुरक्षा सुनिश्चित गर्न कृपया आवश्यक PPE, जस्तै प्रयोगशाला कोट र पन्जा लगाउनुहोस्।
