२×सेन्सी डाइरेक्ट प्रिमिक्स-यूएनजी (प्रोब क्यूपीसीआर)
बिरालो नम्बर: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) DNA निकासी वा नमूना तयारी बिना नमूनाहरूबाट सीधा PCR प्रदर्शन गर्न डिजाइन गरिएको हो।यो अभिकर्मकमा हट-स्टार्ट डीएनए पोलिमरेज, युरासिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज (UNG), RNase अवरोधक, MgCl समावेश हुन्छ।2, dNTPs (dTTP को सट्टा dUTP संग), र स्थिरता, मात्रात्मक PCR (qPCR) को लागी।यो अभिकर्मकले उच्च अवरोधक-सहिष्णुतालाई पूर्वरूप दिन्छ, र यसरी यसलाई सीधै नमूनाहरू पत्ता लगाउन घाँटी स्वाब, लार, एन्टी-कोगुलेटेड सम्पूर्ण रगत, प्लाज्मा, र सीरम DNA निकासी बिना नै प्रयोग गर्न सकिन्छ।अभिकर्मकले एन्टी-इनहिबिटरी DNA पोलिमरेज र UNG इन्जाइमको मिश्रित इन्जाइमहरूसँग qPCR को लागि स्वामित्व बफर प्रयोग गर्दछ।त्यसकारण, यसले अवरोधकहरू भएका नमूनाहरूमा लक्षित जीनहरूको राम्रो प्रवर्धन प्राप्त गर्न सक्छ र PCR अवशिष्ट र एरोसोल प्रदूषणको कारणले गर्दा गलत सकारात्मक प्रवर्धनलाई रोक्छ।यो अभिकर्मक धेरै फ्लोरोसेन्ट मात्रात्मक पीसीआर उपकरणहरूसँग उपयुक्त छ, जस्तै एप्लाइड बायोसिस्टम, एपेन्डर्फ, बायो-राड, रोचे र यस्तै।
अवयवहरू
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG मिक्स
2. 2×SensiDirect Premix बफर (dUTP)
भण्डारण अवस्थाहरू
सबै कम्पोनेन्टहरू लामो अवधिको भण्डारणको लागि -20 ℃ मा र 3 महिना सम्म 4 ℃ मा राख्नुपर्छ।कृपया पग्लिएपछि राम्ररी मिलाउनुहोस् र प्रयोग गर्नु अघि सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्।बारम्बार फ्रिज-थवबाट बच्नुहोस्।
साइकल प्रोटोकल
| चरण | तापक्रम | समय | साइकल |
| पाचन | ५० ℃ | २ मिनेट | 1 |
| पोलिमरेज सक्रियता | 95 ℃ | १-५ मिनेट | 1 |
| डेन्चर | 95 ℃ | १०-२० सेकेन्ड | 40-50 |
| एनिलिङ/विस्तार | ५६-६४ ℃ | २०-६० को दशक |
पाइपिङ निर्देशनहरू
| अभिकर्मक | भोल्यूम प्रति प्रतिक्रिया | प्रति प्रतिक्रिया भोल्युम | अन्तिम एकाग्रता |
| 2×SensiDirect Premix बफर (dUTP) | 12.5µL | २५µL | १× |
| ५० × SensiDirect Enzyme/UNG मिक्स | ०.५µL | १µL | १× |
| 25×प्राइमर-प्रोब मिक्स१, २ | १µL | २µL | १× |
| नमूना३, ४ | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| कुल मात्रा | २५ μL | ५० μL | - |
1. प्राइमरको अन्तिम एकाग्रता सामान्यतया 0.2μM हुन्छ।राम्रो परिणामहरूको लागि, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1μM को दायरा भित्र अनुकूलित गर्न सकिन्छ।
2. सामान्यतया, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3μM को दायरा भित्र अनुकूलित गर्न सकिन्छ।प्रोबको इष्टतम एकाग्रता वास्तविक समयको पीसीआर प्रवर्द्धन उपकरण, प्रोबको प्रकार, र फ्लोरोसेन्ट लेबलिङ पदार्थको प्रकारसँग सम्बन्धित छ।कृपया इन्स्ट्रुमेन्ट म्यानुअल वा प्रत्येक फ्लोरोसेन्ट प्रोबको विशेष आवश्यकताहरू हेर्नुहोस्।
3. विभिन्न प्रकारका नमूनाहरूमा अवरोधकको विभिन्न प्रकार र सामग्री र लक्षित जीनको प्रतिलिपि संख्या समावेश हुन्छ।नमूना मात्रा वास्तविक अवस्था द्वारा विचार गर्नुपर्छ।यदि आवश्यक भएमा न्यूक्लिज-मुक्त पानी वा TE बफर थपेर नमूनालाई कमजोर बनाउनुहोस्।
4. विभिन्न नमूनाहरूको सिफारिस गरिएको मात्रा:
| नमूना | एक 50 को लागि भोल्युम μL प्रतिक्रिया | अधिकतम अनुपात |
| एन्टीकोगुलेटेड सम्पूर्ण रगत | 2.5 μL | 5% |
| प्लाज्मा | १५ μL | ३०% |
| सीरम | १० μL | २०% |
| घाँटी स्वाब | १० μL | २०% |
| लार | १० μL | २०% |
गुणस्तर नियन्त्रण
1. प्रकार्य पत्ता लगाउने: qPCR को संवेदनशीलता, विशिष्टता र दोहोर्याउने योग्यता।
२. एक्सोजेनस न्यूक्लिज गतिविधि छैन: एक्सोजेनस एन्डोन्यूक्लिज र एक्सोन्यूक्लिज प्रदूषण छैन।
उत्पादनका नोटहरू
1. यो उत्पादनले नयाँ प्रकारको हट-स्टार्ट DNA पोलिमरेज प्रयोग गर्दछ, जुन 1-5 मिनेटमा सक्रिय गर्न सकिन्छ। यसको प्रतिक्रिया बफर अप्टिमाइज गरिएको हुनाले, यो प्रोब विधि प्रयोग गरेर डबल वा धेरै फ्लोरोसेन्स मात्रात्मक PCR को लागि अधिक उपयुक्त छ।
2. यदि PCR एम्प्लीफिकेशनको Rn मान धेरै कम छ वा एम्प्लीफिकेशन स्पष्ट रूपमा रोकिएको छ भने, नमूनाको मात्रा घटाउँदै, प्रतिक्रियाको मात्रा बढाएर वा नमूनाको अघिल्लो कमजोरीले परिणामहरू सुधार गर्न सक्छ।
3. रगत, लार, पिसाब, घाँटी स्वाब, आदि को संकलन क्लिनिकल मापदण्ड आवश्यकताहरु को पालना गर्नुपर्छ, र ताजा नमूना न्यूक्लिक एसिड गिरावट रोक्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।
4. विभिन्न एम्प्लिकनहरूमा dUTP र UNG को संवेदनशीलताको लागि फरक उपयोग क्षमता भएको हुनाले, UNG प्रणाली प्रयोग गर्दा पत्ता लगाउने संवेदनशीलता कम भएमा अभिकर्मकहरूलाई अनुकूलित गरिनुपर्छ।आवश्यक भएमा प्राविधिक सहयोगको लागि कृपया हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्।
5. एक-चरण प्रतिक्रियाहरू बीचको क्यारीओभर PCR उत्पादनहरूको प्रवर्धनबाट बच्न, प्रवर्धनको लागि समर्पित प्रयोगात्मक क्षेत्र र पिपेट आवश्यक छ।पन्जा लगाएर चलाउनुहोस् र बारम्बार परिवर्तन गर्नुहोस् र PCR प्रवर्द्धन पछि प्रतिक्रिया ट्यूब नखोल्नुहोस्।
