युनिभर्सल SYBR GREEN qPCR प्रिमिक्स (नीलो)
बिरालो नम्बर: HCB5041B
युनिभर्सल ब्लू qPCR मास्टर मिक्स (डाई आधारित) 2×वास्तविक-समय मात्रात्मक PCR एम्प्लीफिकेशनको लागि पूर्व-समाधान हो जुन उच्च संवेदनशीलता र विशिष्टता द्वारा विशेषता हो, नीलो रंगको छ, र नमूना थप ट्रेसिङको प्रभाव छ।कोर कम्पोनेन्ट Taq DNA पोलिमरेजले नमूना तयारीको क्रममा प्राइमर एनिलिङका कारण गैर-विशिष्ट प्रवर्धनलाई प्रभावकारी रूपमा रोक्न एन्टिबडी हट स्टार्ट प्रयोग गर्दछ।एकै समयमा, सूत्रले PCR प्रतिक्रियाको एम्प्लीफिकेशन दक्षता सुधार गर्न र विभिन्न GC सामग्रीहरू (30 ~ 70%) सँग जीनहरूको प्रवर्धनलाई समान बनाउन प्रवर्द्धनकारी कारकहरू थप्छ, ताकि मात्रात्मक PCR ले व्यापक मात्रात्मकमा राम्रो रेखीय सम्बन्ध प्राप्त गर्न सक्छ। क्षेत्र।यो उत्पादनले विशेष ROX निष्क्रिय सन्दर्भ डाई समावेश गर्दछ, जुन धेरैजसो qPCR उपकरणहरूमा लागू हुन्छ।विभिन्न उपकरणहरूमा ROX को एकाग्रता समायोजन गर्न आवश्यक छैन।प्रवर्धनको लागि प्रतिक्रिया प्रणाली तयार गर्न प्राइमरहरू र टेम्प्लेटहरू थप्न मात्र आवश्यक छ।
अवयवहरू
युनिभर्सल ब्लू qPCR मास्टर मिक्स
भण्डारण अवस्थाहरू
उत्पादन आइस प्याक संग पठाइएको छ र -25 ℃ ~ -15 ℃ मा 18 महिनाको लागि भण्डारण गर्न सकिन्छ।प्रतिक्रिया प्रणाली भण्डारण वा तयारी गर्दा बलियो प्रकाश विकिरणबाट बच्न आवश्यक छ।
निर्दिष्टीकरण
| एकाग्रता | २× |
| पत्ता लगाउने विधि | SYBR |
| पीसीआर विधि | qPCR |
| पोलिमरेज | Taq DNA पोलिमरेज |
| नमूना को प्रकार | DNA |
| आवेदन उपकरण | अधिकांश qPCR उपकरणहरू |
| उत्पादन प्रकार | वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक PCR को लागि SYBR प्रिमिक्स |
| आवेदन दिनुहोस् (आवेदन) | जीन अभिव्यक्ति |
निर्देशनहरू
1. प्रतिक्रिया प्रणाली
| अवयवहरू | भोल्युम(μL) | भोल्युम(μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| युनिभर्सल SYBR GREEN qPCR प्रिमिक्स | 25 | 10 | १× |
| फर्वार्ड प्राइमर (10μmol/L) | 1 | ०.४ | ०.२ μmol/L |
| उल्टो प्राइमर (10μmol/L) | 1 | ०.४ | ०.२ μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | 50 सम्म | 20 सम्म | - |
[नोट]: बलियो हल्लाबाट अत्यधिक बुलबुलेबाट बच्न प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनुहोस्।
a) प्राइमर एकाग्रता: अन्तिम प्राइमर एकाग्रता 0.2μmol/L हो, र उपयुक्त भएमा 0.1 र 1.0μmol/L बीच समायोजन गर्न सकिन्छ।
b) टेम्प्लेट एकाग्रता: यदि टेम्प्लेट अनडिलुटेड cDNA स्टक समाधान हो भने, प्रयोग गरिएको भोल्युम qPCR प्रतिक्रियाको कुल मात्राको 1/10 भन्दा बढी हुनु हुँदैन।
ग) टेम्प्लेट पातलो: यो 5-10 पटक द्वारा cDNA स्टक समाधान पातलो गर्न सिफारिस गरिएको छ।एम्प्लीफिकेशनद्वारा प्राप्त Ct मान २०-३० चक्रमा थपिएको टेम्प्लेटको अधिकतम मात्रा राम्रो हुन्छ।
घ) प्रतिक्रिया प्रणाली: लक्षित जीन प्रवर्धनको प्रभावकारिता र दोहोरिने योग्यता सुनिश्चित गर्न 20μL वा 50μL प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।
e) प्रणाली तयारी: कृपया सुपर क्लिन बेन्चमा तयारी गर्नुहोस् र न्यूक्लिज अवशेष बिना टिप्स र प्रतिक्रिया ट्यूबहरू प्रयोग गर्नुहोस्;यो फिल्टर कारतूस संग सुझावहरू प्रयोग गर्न सिफारिस गरिएको छ।क्रस प्रदूषण र एरोसोल प्रदूषणबाट बच्नुहोस्।
2।प्रतिक्रिया कार्यक्रम
मानक कार्यक्रम
| साइकल चरण | अस्थायी। | समय | साइकलहरू |
| प्रारम्भिक विकृतीकरण | 95 ℃ | २ मिनेट | 1 |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | १० सेकेन्ड | 40 |
| एनिलिङ/विस्तार | ६० ℃ | ३० सेकेन्ड★ | |
| पिघलने वक्र चरण | उपकरण पूर्वनिर्धारित | 1 | |
द्रुत कार्यक्रम
| साइकल चरण | अस्थायी। | समय | साइकलहरू |
| प्रारम्भिक विकृतीकरण | 95 ℃ | ३० सेकेन्ड | 1 |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | ३ सेकेन्ड | 40 |
| एनिलिङ/विस्तार | ६० ℃ | २० सेकेन्ड★ | |
| पिघलने वक्र चरण | उपकरण पूर्वनिर्धारित | 1 | |
[नोट]: द्रुत कार्यक्रम जीनहरूको विशाल बहुमतको लागि उपयुक्त छ, र मानक कार्यक्रमहरू व्यक्तिगत जटिल माध्यमिक संरचना जीनहरूको लागि प्रयास गर्न सकिन्छ।
क) एनिलिङ तापक्रम र समय: कृपया प्राइमर र लक्षित जीनको लम्बाइ अनुसार समायोजन गर्नुहोस्।
b) फ्लोरोसेन्स सिग्नल एक्विजिसन (★): कृपया उपकरणको प्रयोगको लागि निर्देशनहरूमा आवश्यकताहरू अनुसार प्रयोगात्मक प्रक्रिया सेट गर्नुहोस्।
ग) पिघलने वक्र: उपकरण पूर्वनिर्धारित कार्यक्रम सामान्य रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।
3. परिणाम विश्लेषण
परिमाणात्मक प्रयोगहरूको लागि न्यूनतम तीन जैविक प्रतिकृतिहरू आवश्यक थिए।प्रतिक्रिया पछि, प्रवर्धन वक्र र पिघलने वक्र पुष्टि गर्न आवश्यक छ।
३.१ प्रवर्धन वक्र:
मानक प्रवर्धन वक्र S आकारको छ।Ct मान 20 र 30 को बीचमा पर्दा मात्रात्मक विश्लेषण सबैभन्दा सही हुन्छ। यदि Ct मान 10 भन्दा कम छ भने, टेम्प्लेटलाई पातलो गरी फेरि परीक्षण गर्न आवश्यक छ।जब Ct मान 30-35 को बीचमा हुन्छ, टेम्प्लेट एकाग्रता वा प्रतिक्रिया प्रणालीको भोल्युम बढाउन आवश्यक छ, ताकि प्रवर्धन दक्षता सुधार गर्न र परिणाम विश्लेषणको शुद्धता सुनिश्चित गर्न।जब Ct मान 35 भन्दा बढी हुन्छ, परीक्षण परिणामहरूले मात्रात्मक रूपमा जीनको अभिव्यक्तिको विश्लेषण गर्न सक्दैन, तर गुणात्मक विश्लेषणको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
३.२ पिघलने वक्र:
पग्लने वक्रको एकल शिखरले प्रतिक्रिया विशिष्टता राम्रो छ र मात्रात्मक विश्लेषण गर्न सकिन्छ भनेर संकेत गर्दछ;यदि पिघलने वक्रले डबल वा धेरै चोटीहरू देखाउँछ भने, मात्रात्मक विश्लेषण गर्न सकिँदैन।पिघलने वक्रले दोहोरो चुचुराहरू देखाउँछ, र यो निर्णय गर्न आवश्यक छ कि गैर-लक्ष्य शिखर प्राइमर डाइमर हो वा DNA agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा गैर-विशिष्ट प्रवर्धन।यदि यो प्राइमर डाइमर हो भने, यो प्राइमर एकाग्रता कम गर्न वा उच्च प्रवर्द्धन दक्षता संग प्राइमरहरू पुन: डिजाइन गर्न सिफारिस गरिन्छ।यदि यो गैर-विशिष्ट प्रवर्धन हो भने, कृपया एनेलिङको तापक्रम बढाउनुहोस्, वा विशिष्टताका साथ प्राइमरहरू पुन: डिजाइन गर्नुहोस्।
नोटहरू
कृपया आफ्नो स्वास्थ्य र सुरक्षा सुनिश्चित गर्न आवश्यक PPE, जस्तै प्रयोगशाला कोट र पन्जा लगाउनुहोस्!
यो उत्पादन अनुसन्धान प्रयोगको लागि मात्र हो!
