एक चरण RT-qPCR SYBR ग्रीन प्रिमिक्स
बिरालो नम्बर: HCB5140A
वन स्टेप RT-qPCR साइबर ग्रीन प्रिमिक्स SYBR ग्रीन I डाईमा आधारित फ्लोरोसेन्स क्वान्टिफिकेशनको लागि हो।जीन-विशिष्ट प्राइमरहरू प्रयोग गरेर, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन र क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाहरू एक ट्यूबमा पूरा हुन्छन्, बारम्बार क्याप-ओपनिङ र पाइपिङ अपरेसनहरूको आवश्यकतालाई हटाउँदै, परख दक्षतामा धेरै सुधार गर्छ र प्रदूषणको जोखिम कम गर्छ।आरएनए नमूनाहरूका लागि, किटले कुशल सीडीएनए संश्लेषणको लागि ताप-प्रतिरोधी रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेज र मात्रात्मक प्रवर्धनको लागि हटस्टार्ट टाक डीएनए पोलिमरेज प्रयोग गर्दछ।अनुकूलित बफर प्रणाली अन्तर्गत, किटको संवेदनशीलता उच्च अभिव्यक्त लक्ष्यहरूको लागि 0.1 pg र मध्यम रूपमा व्यक्त लक्ष्यहरूको लागि 1 pg सम्म हुन सक्छ।किट डीएनए नमूनाहरूको प्रवर्धन र मात्राको लागि उपयुक्त छ।यसले बिभिन्न बोटबिरुवा र जनावरका नमूनाहरू, कोशिकाहरू र सूक्ष्मजीवहरूबाट न्यूक्लिक एसिडहरूको संवेदनशील पत्ता लगाउन र मात्रा निर्धारण गर्न सक्षम बनाउँछ।
अवयवहरू
| No | नाम | भोल्युम | भोल्युम |
| 1 | उन्नत बफर | 250 μL | २×१.२५ एमएल |
| 2 | उन्नत इन्जाइम मिक्स | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase फ्री एच2O | 250 μL | २×१.२५ एमएल |
भण्डारण सर्तहरू
यो उत्पादन -25 ~ -15 ℃ मा 1 वर्ष को लागि प्रकाश देखि टाढा भण्डारण गर्नुपर्छ।
निर्देशनहरू
1. प्रतिक्रिया प्रणाली कन्फिगरेसनd
| अवयवहरू | भोल्युम (μL) | भोल्युम (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| उन्नत बफर | १२.५ | 25 | १× |
| उन्नत इन्जाइम मिक्स | 1 | 2 | - |
| फर्वार्ड प्राइमर (१० μmol/L)a | ०.५ | 1 | ०.२ μmol/L |
| उल्टो प्राइमर (१० μmol/L)a | ०.५ | 1 | ०.२ μmol/L |
| आरएनए टेम्प्लेटb | X | X | - |
| RNase फ्री एच2ओc | 25 सम्म | 50 सम्म | - |
नोट:
१) क.Tउसको अन्तिम प्राइमर एकाग्रता 0.2 μmol/L थियो, जसलाई 0.1 र 1μmol/L बीचमा पनि उपयुक्त रूपमा समायोजन गर्न सकिन्छ।
२) ख।अभिकर्मक अत्यन्त संवेदनशील छ, 1pg-1μg को दायरामा कुल RNA संग, र मानव नमूनाहरूको परीक्षणले 1 pg-100 ng को इष्टतम इनपुट देखाएको छ, 15-30 को दायरामा उपयुक्त रूपमा Ct मानको लागि नियन्त्रण।
३) ग।लक्ष्य जीन प्रवर्धनको वैधता र प्रजनन योग्यता सुनिश्चित गर्न 20μL वा 50μL प्रयोग गर्न सिफारिस गरिन्छ।
४) घ।कृपया अल्ट्रा-क्लिन बेन्चमा तयार हुनुहोस् र न्यूक्लिज अवशेष-रहित टिप्स र प्रतिक्रिया ट्यूबहरू प्रयोग गर्नुहोस्;फिल्टर कारतूसको साथ सुझावहरू सिफारिस गरिन्छ।क्रस प्रदूषण र एरोसोल प्रदूषणबाट बच्नुहोस्।
2.प्रतिक्रिया कार्यक्रम
| साइकल चरण | अस्थायी। | समय | साइकलहरू |
| उल्टो ट्रान्सक्रिप्शन | ५० ℃a | ६ मिनेट | 1 |
| प्रारम्भिक विकृतीकरण | 95 ℃ | ५ मिनेट | 1 |
| प्रवर्धन प्रतिक्रिया | 95 ℃ | १५ सेकेन्ड | 40 |
| ६० ℃b | ३० सेकेन्ड | ||
| पिघलने वक्र चरण | उपकरण पूर्वनिर्धारित | 1 | |
नोट:
१) क.रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन तापमान प्रयोगात्मक आवश्यकता अनुसार 50-55 डिग्री सेल्सियस बीच चयन गर्न सकिन्छ।DNA नमूनाहरूको लागि, रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्रक्रिया हटाउन सकिन्छ।
२) ख।विशेष अवस्थामा annealing/विस्तार तापमान प्राइमर Tm मान अनुसार समायोजन गर्न सकिन्छ, 60°C सिफारिस गरिन्छ।
नोटहरू
1. यो उत्पादन अनुसन्धान प्रयोगको लागि मात्र हो।
2. कृपया आफ्नो सुरक्षाको लागि प्रयोगशाला कोट र डिस्पोजेबल पन्जा प्रयोग गर्नुहोस्।
