Rnase अवरोधक (ग्लिसरोल मुक्त)
Murine RNase अवरोधक एक पुन: संयोजक murine RNase अवरोधक व्यक्त र E.coli बाट शुद्ध छ।यो RNase A, B वा C सँग 1: 1 अनुपातमा गैर-सहसंयोजक बन्धन मार्फत बाँध्छ, जसले गर्दा तीन इन्जाइमहरूको गतिविधिलाई रोक्छ र RNA लाई गिरावटबाट बचाउँछ।यद्यपि, यो Aspergillus बाट RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H वा RNase विरुद्ध प्रभावकारी छैन।Murine RNase अवरोधक RT-PCR, RT-qPCR र IVT mRNA द्वारा परीक्षण गरिएको थियो, र विभिन्न व्यावसायिक रिभर्स ट्रान्सक्रिप्टेस, डीएनए पोलिमेरासेस र आरएनए पोलिमरेजहरूसँग उपयुक्त थियो।
मानव RNase अवरोधकहरूको तुलनामा, murine RNase अवरोधकले दुई सिस्टिनहरू समावेश गर्दैन जुन अक्सीकरणको लागि अत्यधिक संवेदनशील हुन्छ जसले अवरोधकको निष्क्रियता निम्त्याउँछ।यसले यसलाई DTT को कम सांद्रता (1 mM भन्दा कम) मा स्थिर बनाउँछ।यो सुविधाले यसलाई प्रतिक्रियाहरूमा प्रयोगको लागि उपयुक्त बनाउँछ जहाँ DTT को उच्च सांद्रता प्रतिक्रियाको लागि प्रतिकूल हुन्छ (जस्तै वास्तविक-समय RT-PCR)।
Aआवेदन
यो उत्पादन कुनै पनि प्रयोगमा व्यापक रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ जहाँ RNase हस्तक्षेपबाट बच्न सम्भव छ, जस्तै:
1. फर्स्ट-स्ट्र्यान्ड cDNA संश्लेषण, RT-PCR, RT-qPCR, आदि;
2. इन-भिट्रो ट्रान्सक्रिप्शन/अनुवाद (जस्तै भिट्रोमा भाइरल प्रतिकृति);
3. आरएनए अलगाव र शुद्धीकरण को समयमा RNase गतिविधि को अवरोध।
भण्डारण सर्तहरू
-25～-15℃ मा भण्डारण;
फ्रिज-थाउ चक्र ≤ 5 पटक;
१ वर्षको लागि मान्य।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइ RNase A को 5 ng को गतिविधिलाई 50% द्वारा रोक्न आवश्यक RNase अवरोधकको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिएको छ।
आणविक वजन
RNase अवरोधक (Glycerol-free) एक 50 kDa प्रोटीन हो।
गुणस्तर नियन्त्रण
Exonuclease गतिविधि:
1 μg λ-Hind III डाइजेस्ट DNA को 16 घण्टाको लागि 37°C मा इन्जाइमको 40 U को इन्क्युबेशनले जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार DNA को कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास भएन।
Endonuclease गतिविधि:
1 μg λ DNA को साथ 16 घण्टाको लागि 37°C मा इन्जाइमको 40 U को इन्क्युबेशनले जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार DNA को कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास भएन।
निकिङ गतिविधि:
1 μg pBR322 को साथ 16 घण्टाको लागि 37 ℃ मा इन्जाइमको 40 U को इन्क्युबेशनले जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार DNA को कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास भएन।
RNase गतिविधि:
1.6 μg MS2 RNA को 40 U इन्जाइमको 37 ℃ मा 4 घण्टाको लागि इन्क्युबेशनले जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार RNA को कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास भएन।
E.कोलाई डीएनए:
TaqMan qPCR द्वारा इन्जाइमको 40 U पत्ता लगाइएको छ।E.coli DNA ≤ 0. 1pg/40U हो।
Notes
1. इन्जाइमको निष्क्रियता रोक्नको लागि हिलाउने वा हिंस्रक रूपमा हलचल नगर्नुहोस्।
2.RNase अवरोधक 25℃ देखि 55℃ सम्मको तापक्रममा सक्रिय हुन्छ र ≥65℃ मा निष्क्रिय हुन्छ।
3. RNase H, RNase 1, र RNase T1 को गतिविधिलाई निषेध गरिएको छैन।
4. RNase गतिविधिलाई रोक्नको लागि pH दायरा फराकिलो छ (pH 5-9 मा सक्रिय), pH 7-8 मा अधिकतम गतिविधि प्रदर्शन गर्दै।
