तापमान संवेदनशील UNG
तापमान संवेदनशील UNG (TS-UNG) E. coli मा पुनः संयोजक अभिव्यक्ति द्वारा प्राप्त गरिएको हो।इन्जाइमले युरासिल युक्त एकल- र डबल-स्ट्र्यान्ड डीएनएबाट मुक्त यूरासिलको रिलीजलाई उत्प्रेरित गर्दछ र आरएनए विरुद्ध निष्क्रिय हुन्छ।ई. कोलाई जीन उत्पत्तिको परम्परागत UNG इन्जाइमको तुलनामा, TS-UNG इन्जाइमको कम तापक्रम (20 ℃ ~ 37 ℃) मा उच्च गतिविधि हुन्छ र तापमान संवेदनशील र सजिलैसँग निष्क्रिय (50 ℃) हुन्छ, dUTP- युक्त प्रवर्धनको ह्रासबाट बच्न। परम्परागत UNG इन्जाइमको निष्क्रियता पछि रहन सक्ने अवशिष्ट गतिविधि द्वारा कोठाको तापमानमा उत्पादनहरू।तसर्थ, TS-UNG इन्जाइम PCR प्रदूषण रोकथाम प्रतिक्रियाको लागि मात्र उपयुक्त छैन, तर RT-PCR प्रवर्द्धन कार्यक्रमसँग पनि राम्रोसँग मेल खान्छ र RT-PCR प्रदूषण रोकथाम प्रतिक्रियामा प्रयोग गर्न सकिन्छ।
सिफारिस गरिएको आवेदन
प्रदूषण रोकथाम प्रवर्धन
भण्डारण अवस्था
-20 डिग्री सेल्सियस लामो अवधिको भण्डारणको लागि, प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनु पर्छ, बारम्बार फ्रिज-थउबाट बच्न।
भण्डारण बफर
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, स्टेबिलाइजर, 50% ग्लिसरोल।
एकाइ परिभाषा
1µg सिंगल-स्ट्र्यान्डेड DNA को 37°C मा 1 घण्टामा dU आधारहरू घटाउन आवश्यक इन्जाइमको मात्रा गतिविधिको 1 एकाइ (U) हो।
गुणस्तर नियन्त्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता ९८% भन्दा बढी
2.गिरावट गतिविधि, ब्याच-देखि-ब्याच नियन्त्रण, स्थिरता
3.कुनै exogenous nuclease गतिविधि छैन, exogenous endonuclease वा exonuclease प्रदूषण छैन।
निर्देशनहरू
| अवयवहरू | भोल्युम (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| 10 × PCR बफर (dNTP फ्री, Mg²+नि:शुल्क) | 5 | १× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP बदल्नुहोस्) | - | 200-600 μM |
| २५ एमएम एमजीसीएल2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| ५ U/μL Taq | ०.२५ | १.२५ U |
| 1 U/μLTS-UNG | ०.५ (०.१-०.५) | ०.५ यू (०.१-०.५ यू) |
| २५ × प्राइमर मिक्सa | 2 | १× |
| टेम्प्लेट | - | 1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | ५० सम्म | - |
नोट: a: यदि qPCR/qRT-PCR को लागि प्रयोग गरिन्छ भने, फ्लोरोसेन्ट प्रोबलाई प्रतिक्रिया प्रणालीमा थपिनुपर्छ।सामान्यतया, ०.२ μM को अन्तिम प्राइमर एकाग्रताले राम्रो परिणाम दिन सक्छ;जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब हुन्छ, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM को दायरामा समायोजित गर्न सकिन्छ।सामान्यतया, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3 μM को दायरामा अनुकूलित हुन्छ।प्राइमर र प्रोबको उत्तम संयोजन फेला पार्न एकाग्रता ग्रेडियन्ट प्रयोगहरू गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
1.TS-UNG इन्जाइमको इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान अपेक्षाकृत कम छ, र यसलाई 20 ℃ ~ 37 ℃ को दायरामा अनुकूलित गर्न सकिन्छ, इन्जाइमको खुराक र प्रतिक्रिया समय 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ को दायरामा अनुकूलित गर्न सकिन्छ। १० मिनेट;र इन्जाइमलाई उल्टो ट्रान्सक्रिप्शनको प्रक्रियामा निष्क्रिय गर्न सकिन्छ।
2.यो PCR र RT-PCR को लागि प्रदूषण रोक्न उपयुक्त छ।
3.बारम्बार फ्रिज-थउबाट जोगिनुहोस्, र ठूलो तापमान उतार-चढ़ावको सामना नगर्नुहोस्।
4.एम्प्लीफाइड हुने बिभिन्न जीनहरूमा dUTP को भिन्न उपयोग दक्षता र UNG इन्जाइमको संवेदनशीलता हुन्छ, त्यसैले, यदि UNG प्रणालीको प्रयोगले पत्ता लगाउने संवेदनशीलतामा कमी ल्यायो भने, प्रतिक्रिया प्रणालीलाई समायोजन र अप्टिमाइज गर्नुपर्छ, यदि तपाईंलाई प्राविधिक सहयोग चाहिन्छ भने, कृपया सम्पर्क गर्नुहोस्। हाम्रो कम्पनी।
