UDG/UNG इन्जाइमहरू
UDG (uracil DNA glycosylase) ले ssDNA र dsDNA मा uracil आधार र सुगर-फस्फेट ब्याकबोन बीचको N-glycosidic लिङ्कको हाइड्रोलाइसिसलाई उत्प्रेरित गर्न सक्छ।यसले सजिलैसँग एरोसोल प्रदूषण नियन्त्रण गर्न सक्छ र PCR, qPCR, RT-qPCR र LAMP जस्ता सामान्य आणविक जीवविज्ञान प्रणालीहरूको लागि उपयुक्त छ।
निर्दिष्टीकरणहरू
| अभिव्यक्ति होस्ट | पुन: संयोजक ई. कोलिथ युरासिल डीएनए ग्लाइकोसिलेज जीन |
| आणविक वजन | 24. 8kDa |
| शुद्धता | ≥95% (SDS-PAGE) |
| गर्मी निष्क्रियता | 95℃, 5~10 मिनेट |
| एकाइ परिभाषा | एक एकाइ (U) लाई 25 ℃ मा 30 मिनेटमा l μg dU- युक्त dsDNA को हाइड्रोलिसिस उत्प्रेरित गर्न आवश्यक इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिएको छ। |
भण्डारण
उत्पादन दुई वर्षको लागि -25℃~-15°C मा भण्डारण गर्नुपर्छ।
निर्देशनहरू
1.निम्न प्रणाली अनुसार PCR प्रतिक्रिया मिश्रण को तयारी
| अवयवहरू | भोल्युम (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| 10×PCR बफर (Mg²+प्लस) | 5 | १× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(१० mmol/L) | 3 | ०.६ mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/लीच |
| टेम्प्लेट डीएनए | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | ०.४ μmol/L |
| प्राइमर 2 (10μmol/L) | 2 | ०.४ μmol/L |
| Taq DNA पोलिमरेज (5 U/μL) | ०. ५ | ०. ०५ U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50 सम्म | - |
नोट: प्रयोगात्मक आवश्यकताहरू अनुसार, dUTP को अन्तिम एकाग्रता 0.2-0.6 mmol/L बीच समायोजन गर्न सकिन्छ, र 0.2 mmol/L dTTP चयन रूपमा थप्न सकिन्छ।
2.प्रवर्धन प्रक्रिया
| साइकल चरण | तापक्रम | समय | साइकलहरू |
| dU- युक्त टेम्प्लेट गिरावट | २५ ℃ | १० मिनेट | 1 |
| UDG सक्रियता, टेम्प्लेट प्रारम्भिक विकृतीकरण | 95 ℃ | ५~१० मिनेट | 1 |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | १० सेकेन्ड |
३०-३५ |
| एनिलिङ | ६० ℃ | २० सेकेन्ड | |
| विस्तार | ७२ ℃ | ३० सेकेन्ड/केबी | |
| अन्तिम विस्तार | ७२ ℃ | ५ मिनेट | 1 |
नोट: 25 डिग्री सेल्सियसमा प्रतिक्रिया समय प्रयोगात्मक आवश्यकताहरू अनुसार 5-10 मिनेट भित्र समायोजित गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
1.UDG धेरै PCR प्रतिक्रिया बफरहरूमा सक्रिय छ।
2.इन्जाइमहरू प्रयोग गर्दा आइसबक्समा वा आइस बाथमा भण्डार गर्नुपर्छ, र प्रयोग पछि तुरुन्तै -20 डिग्री सेल्सियसमा भण्डारण गर्नुपर्छ।
3.कृपया आफ्नो स्वास्थ्य र सुरक्षा सुनिश्चित गर्न आवश्यक PPE, जस्तै प्रयोगशाला कोट र पन्जा लगाउनुहोस्!
