Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG वा UDG) 25 kDa को आणविक वजन भएको E.coli को पुन: संयोजक क्लोन हो।यसले uracil युक्त सिंगल-स्ट्र्यान्डेड र डबल-स्ट्र्यान्डेड DNA बाट मुक्त uracil को रिलीजलाई उत्प्रेरित गर्दछ, र RNA विरुद्ध निष्क्रिय छ, र PCR प्रवर्द्धन उत्पादनहरूको प्रदूषण रोक्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।कार्यको सिद्धान्त यस तथ्यमा आधारित छ कि यदि dUTP लाई PCR प्रतिक्रियामा dTTP को लागि प्रतिस्थापन गरिएको छ र dU आधारहरू भएको PCR प्रवर्द्धन उत्पादन बनाइन्छ भने, इन्जाइमले एकल-स्ट्र्यान्ड र डबल-स्ट्र्यान्डमा U आधारहरूको ग्लाइकोसिडिक बन्धनलाई छनोट गर्न सक्छ। DNA र PCR प्रवर्द्धन उत्पादन घटाउँछ।
सिफारिस गरिएको आवेदन
प्रदूषण रोकथाम प्रवर्धन
भण्डारण अवस्था
-20 डिग्री सेल्सियस लामो अवधिको भण्डारणको लागि, प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनु पर्छ, बारम्बार फ्रिज-थउबाट बच्न।
भण्डारण बफर
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, स्टेबिलाइजर, 50% ग्लिसरोल।
एकाइ परिभाषा
1µg सिंगल-स्ट्र्यान्डेड DNA को dU आधारहरू 1 घण्टामा 37°C मा घटाउन आवश्यक इन्जाइमको मात्रा 1 एकाइ हो।
गुणस्तर नियन्त्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता ९८% भन्दा बढी
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, ब्याच-देखि-ब्याच नियन्त्रण, स्थिरता
3.UNG को 1U 50 ℃ मा 2 मिनेटको लागि उपचार गरिसकेपछि, 103 प्रतिलिपिहरू भन्दा कम U भएको टेम्प्लेट पूर्ण रूपमा डिग्रेड गरिनु पर्छ र कुनै प्रवर्द्धन उत्पादन उत्पादन गर्न सकिँदैन।
4.कुनै बाह्य न्यूक्लिज गतिविधि छैन
निर्देशनहरू
| अवयवहरू | भोल्युम (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| 10 × PCR बफर (dNTP फ्री, Mg²+नि:शुल्क) | 5 | १× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP बदल्नुहोस्) | - | 200-600 μM |
| २५ एमएम एमजीसीएल2 | 2-8 μL | 1-4 मिमी |
| ५ U/μL Taq | ०.२५ | १.२५ U |
| ५ U/μL UNG | ०.२५ (०.१-०.५) | ०.२५ यू (०.१-०.५) |
| २५ × प्राइमर मिक्सa | 2 | १× |
| टेम्प्लेट | - | 1μg/प्रतिक्रिया |
| ddH₂O | ५० सम्म | - |
नोट: a: यदि qPCR/qRT-PCR को लागि प्रयोग गरिन्छ भने, फ्लोरोसेन्ट प्रोबलाई प्रतिक्रिया प्रणालीमा थपिनुपर्छ।सामान्यतया, ०.२ μM को अन्तिम प्राइमर एकाग्रताले राम्रो परिणाम दिन सक्छ;जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब हुन्छ, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM को दायरामा समायोजित गर्न सकिन्छ।सामान्यतया, प्रोब एकाग्रता 0.1-0.3 μM को दायरामा अनुकूलित हुन्छ।प्राइमर र प्रोबको उत्तम संयोजन फेला पार्न एकाग्रता ग्रेडियन्ट प्रयोगहरू गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
1.UNG इन्जाइम PCR एम्प्लीफिकेशन प्रतिक्रिया अघि प्रतिक्रिया प्रणालीबाट दूषित dUTP प्रवर्द्धन उत्पादनहरू हटाउन प्रयोग गर्न सकिन्छ, त्यसपछि उत्पादन प्रदूषणको कारण गलत-सकारात्मक परिणामहरूबाट बच्न।
2.एन्टी-कन्टामिनेशन PCR प्रतिक्रियामा प्रयोग गरिने UNG इन्जाइमको लागि इष्टतम तापमान सामान्यतया 2 मिनेटको लागि 50 डिग्री सेल्सियस हुन्छ;निष्क्रिय अवस्था 5 मिनेटको लागि 95 ℃ हो।
3.बारम्बार फ्रिज-थउबाट जोगिनुहोस्, र ठूलो तापमान उतार-चढ़ावको सामना नगर्नुहोस्।
4.एम्प्लीफाइड हुने बिभिन्न जीनहरूमा dUTP को भिन्न उपयोग दक्षता र UNG इन्जाइमको संवेदनशीलता हुन्छ, त्यसैले, यदि UNG प्रणालीको प्रयोगले पत्ता लगाउने संवेदनशीलतामा कमी ल्यायो भने, प्रतिक्रिया प्रणालीलाई समायोजन र अप्टिमाइज गर्नुपर्छ, यदि तपाईंलाई प्राविधिक सहयोग चाहिन्छ भने, कृपया सम्पर्क गर्नुहोस्। हाम्रो कम्पनी।
