र्नासे ए
Ribonuclease A (RNaseA) लगभग 13.7 kDa को आणविक वजन संग 4 डाइसल्फाइड बन्ड समावेश एकल-स्ट्रेन्डेड पोलिपेप्टाइड हो।RNase A एक endoribonuclease हो जसले विशेष रूपमा C र U अवशेषहरूमा एकल-स्ट्र्यान्डेड RNA लाई घटाउँछ।विशेष रूपमा, क्लीभेजले न्यूक्लियोटाइडको 5′-राइबोज र नजिकैको पाइरिमिडिन न्यूक्लियोटाइडको 3′-राइबोजमा फस्फेट समूहद्वारा बनेको फस्फोडिएस्टर बन्डलाई पहिचान गर्दछ, जसले गर्दा 2, 3′-साइक्लिक फोस्पोनाइज्ड 3′-साइक्लिक फोस्फेटहरू छन्। ′न्यूक्लियोसाइड फस्फेट (जस्तै pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp र A-PG उत्पन्न गर्न RNase A द्वारा क्लीभ गरिएको छ)।RNase A एकल-स्ट्र्यान्डेड आरएनए क्लीभिङमा सबैभन्दा सक्रिय छ।सिफारिस गरिएको कार्य एकाग्रता 1-100μG/mL, विभिन्न प्रतिक्रिया प्रणालीहरूसँग उपयुक्त छ।कम नुन सांद्रता (0-100 mM NaCl) एकल-स्ट्र्यान्डेड RNA, डबल-स्ट्र्यान्डेड RNA, र RNA-DNA हाइब्रिडाइजेसनद्वारा बनेको RNA चेनहरू काट्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।यद्यपि, उच्च नुन एकाग्रतामा (≥0.3 M), RNase A ले विशेष रूपमा सिंगल-स्ट्र्यान्डेड आरएनएलाई क्लीभ गर्छ।
प्लाज्मिड DNA वा जीनोमिक DNA को तयारीको क्रममा RNA हटाउन RNase A को प्रयोग गरिन्छ। DNase तयारीको क्रममा सक्रिय छ वा छैन यसले प्रतिक्रियालाई सजिलै असर गर्न सक्छ।पानी नुहाउने परम्परागत विधि DNase गतिविधि निष्क्रिय गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।यो उत्पादन DNase र प्रोटीज समावेश गर्दैन, र प्रयोग गर्नु अघि गर्मी उपचार आवश्यक छैन।थप रूपमा, यो उत्पादन RNase संरक्षण विश्लेषण र RNA अनुक्रम विश्लेषण जस्ता आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरूमा पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
भण्डारण सर्तहरू
उत्पादन -25～-15℃ मा भण्डारण गर्न सकिन्छ, 2 वर्षको लागि मान्य।
निर्देशनहरू
यो RNase A भण्डारण समाधान तयार गर्ने सामान्य तरिकाहरू मध्ये एक हो।द्वारा पनि तयार गर्न सकिन्छप्रयोगशाला वा सन्दर्भ साहित्यमा परम्परागत विधिहरू अनुसार अन्य विधिहरू (जस्तै10 mM Tris-HCl, pH 7.5 वा Tris-NaCl समाधानमा सीधा घुलनशील)
1. RNase A भण्डारण समाधानको 10 mg/mL तयार गर्न 10 mM सोडियम एसीटेट (pH 5.2) प्रयोग गर्नुहोस्।
2. 15 मिनेटको लागि 100 ℃ मा तताउने
3. कोठाको तापक्रममा चिसो, 1 M Tris-HCl (pH 7.4) को 1/10 भोल्युम थप्नुहोस्, यसको pH 7.4 मा समायोजन गर्नुहोस् (का लागिउदाहरण, 10g/ml RNase भण्डारण समाधान 1M Tris-HCL, PH7.4 को 500 ml थप्नुहोस्)
4. जमेको भण्डारणको लागि -20 ℃ मा उप-प्याकेज गरिएको, जुन 2 वर्ष सम्म स्थिर हुन सक्छ।
[नोटहरू]: तटस्थ अवस्थाहरूमा RNaseA समाधान उमालेमा, RNase वर्षा बन्नेछ;यसलाई कम pH मा उमाल्नुहोस्, र यदि त्यहाँ वर्षा हुन्छ भने, यो देख्न सकिन्छ, जुन प्रोटीन अशुद्धता को उपस्थिति को कारण हुन सक्छ।यदि उमालेपछि तलछट फेला पर्यो भने, उच्च-गति सेन्ट्रीफ्यूगेशन (13000rpm) द्वारा अशुद्धता हटाउन सकिन्छ, र त्यसपछि फ्रिजिङ भण्डारणको लागि उप-प्याक गर्न सकिन्छ।
उत्पादन जानकारी
| समानार्थी शब्द | रिबोन्यूक्लिज I;अग्नाशय ribonuclease;रिबोन्यूक्लिज ३'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS नम्बर | 9001-99-4 |
| उपस्थिति | सेतो lyophilized पाउडर |
| आणविक वजन | ~ 13.7kDa (एमिनो एसिड अनुक्रम) |
| Ph मान | ७.६ (गतिविधि दायरा ६-१०) |
| उपयुक्त तापक्रम | ६० ℃ (गतिविधि दायरा १५-७० ℃) |
| सक्रिय गर्ने एजेन्ट | Na2+।के+ |
| अवरोधक | Rnase अवरोधक |
| निष्क्रियता विधि | तताएर निष्क्रिय गर्न सकिँदैन, सेन्ट्रीफ्यूज स्तम्भ प्रयोग गर्न सुझाव दिइन्छ |
| उत्पत्ति | गोभी |
| घुलनशीलता | पानीमा घुलनशील (10mg/ml) |
| सुख्खामा घाटा | ≤5.0% |
| इन्जाइम गतिविधि | ≥60 Kunitz एकाइहरू/mg |
| आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दु | ९.६ |
नोटहरू
तपाईंको सुरक्षा र स्वास्थ्यको लागि, कृपया प्रयोगशाला कोट र सञ्चालनको लागि डिस्पोजेबल पन्जा लगाउनुहोस्।
