र्नासे ए
Ribonuclease A(RNaseA) लगभग 13.7 kDa को आणविक तौल भएको 4 डाइसल्फाइड बन्डहरू भएको एकल-स्ट्र्यान्डेड पोलिपेप्टाइड हो।RNase A is an endoribonuclease जसले विशेष रूपमा C र U अवशेषहरूमा एकल-स्ट्र्यान्डेड RNA लाई घटाउँछ।विशेष रूपमा, क्लीभेजले न्यूक्लियोटाइडको 5'-राइबोज र नजिकैको पाइरिमिडिन न्यूक्लियोटाइडको 3'-राइबोजमा फस्फेट समूहद्वारा बनाइएको फस्फोडिएस्टर बन्डलाई पहिचान गर्दछ, जसले गर्दा 2,3'-साइक्लिक फस्फेटहरू हाइड्रोलाइजिङ हुन्छ। 'न्यूक्लियोसाइड फस्फेटहरू (जस्तै, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp र A-PG उत्पन्न गर्न RNase A द्वारा क्लीभ गरिएको छ)।RNase A एकल-स्ट्र्यान्डेड आरएनए क्लीभिङमा सबैभन्दा सक्रिय छ।सिफारिस गरिएको कार्य एकाग्रता 1- 100 μG/mL, विभिन्न प्रतिक्रिया प्रणालीहरूसँग उपयुक्त छ।कम नुन सांद्रता (0-100 mM NaCl) एकल-स्ट्र्यान्डेड RNA, डबल-स्ट्र्यान्डेड RNA, र RNA-DNA हाइब्रिडाइजेसनद्वारा बनेको RNA चेनहरू काट्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।
यद्यपि, उच्च नुन सांद्रतामा (≥0.3 M), RNase A ले विशेष रूपमा सिंगल-स्ट्र्यान्डेड RNA लाई क्लीभ गर्छ।
RNase A प्राय: प्लाज्मिड DNA वा जीनोमिक DNA को तयारीको क्रममा RNA हटाउन प्रयोग गरिन्छ।तयारी प्रक्रियामा DNase सक्रिय छ वा छैन यसले प्रतिक्रियालाई सजिलै असर गर्न सक्छ।पानी नुहाउने परम्परागत विधि DNase गतिविधि निष्क्रिय गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ।यो उत्पादन DNase र प्रोटीज समावेश गर्दैन, र प्रयोग गर्नु अघि गर्मी उपचार आवश्यक छैन।साथै, यो उत्पादन RNase संरक्षण विश्लेषण र RNA अनुक्रम विश्लेषण जस्ता आणविक जीवविज्ञान प्रयोगहरूमा पनि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
भण्डारण अवस्थाहरू
उत्पादन -25 ℃ ~ - 15 ℃ मा 2 वर्ष को लागि भण्डारण गर्नुपर्छ।
निर्दिष्टीकरणहरू
| उपस्थिति | पाउडर |
| मात्रा | 100 मिलीग्राम / 1 ग्राम |
| उत्पादन प्रकार | आरनेस ए |
निर्देशनहरू
यो RNase A भण्डारण समाधान तयार गर्ने सामान्य तरिकाहरू मध्ये एक हो।यो पनि तयार गर्न सकिन्छप्रयोगशाला वा सन्दर्भ साहित्यमा परम्परागत विधिहरू अनुसार अन्य विधिहरूद्वारा (जस्तै10 mM Tris-HCl, pH 7.5 वा Tris-NaCl समाधानमा सीधा घुलनशील)
1. RNase A भण्डारण समाधानको 10 mg/mL तयार गर्न 10 mM सोडियम एसीटेट (pH 5.2) प्रयोग गर्नुहोस्।
2. 15 मिनेटको लागि 100 ℃ मा तताउने।
3. कोठाको तापक्रममा चिसो, 1 M Tris-HCl (pH 7.4) को 1/10 भोल्युम थप्नुहोस्, यसको pH 7.4 मा समायोजन गर्नुहोस् (का लागिउदाहरण, 10 mg/mL RNase भण्डारण समाधान 1 M Tris-HCl, pH7.4 को 500 mL थप्नुहोस्।
4. जमेको भण्डारणको लागि -20℃ मा उप-प्याकेज गरिएको, जुन 2 वर्ष सम्म स्थिर हुन सक्छ।
[नोटहरू]:
तटस्थ अवस्थाहरूमा RNaseA समाधान उमाल्दा, RNase वर्षा बन्नेछ;यसलाई कम pH मा उमाल्नुहोस्, र यदि त्यहाँ वर्षा हुन्छ भने, यो देख्न सकिन्छ, जुन प्रोटीन अशुद्धता को उपस्थिति को कारण हुन सक्छ।यदि उमालेपछि तलछट फेला पर्यो भने, उच्च-गति सेन्ट्रीफ्युगेशन (13000rpm) द्वारा अशुद्धता हटाउन सकिन्छ, र त्यसपछि फ्रिजिङ भण्डारणको लागि सब-प्याक गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
आफ्नो स्वास्थ्य र सुरक्षा सुनिश्चित गर्न कृपया आवश्यक PPE, जस्तै प्रयोगशाला कोट र पन्जा लगाउनुहोस्।
