DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
बिरालो नम्बर: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) एक endodeoxyribonuclease हो जसले एकल- वा डबल-स्ट्र्यान्ड DNA पचाउन सक्छ।यसले 5'-टर्मिनलमा फस्फेट समूहहरू र 3'-टर्मिनलमा हाइड्रोक्सिलको साथ मोनोडिओक्सिन्युक्लियोटाइडहरू वा एकल- वा डबल-स्ट्र्यान्डेड ओलिगोडिओक्सिन्युक्लियोटाइडहरू उत्पादन गर्न फस्फोडिएस्टर बन्डहरू पहिचान गर्दछ र क्लिभ गर्दछ।DNase I को गतिविधि Ca मा निर्भर गर्दछ2+र Mn जस्ता divalent धातु आयनहरू द्वारा सक्रिय गर्न सकिन्छ2+र Zn2+।५ एमएम Ca2+इन्जाइमलाई हाइड्रोलिसिसबाट बचाउँछ।Mg को उपस्थितिमा2+, इन्जाइमले अनियमित रूपमा DNA को कुनै पनि स्ट्र्यान्डमा कुनै पनि साइटलाई चिन्न र क्लिभ गर्न सक्छ।Mn को उपस्थितिमा2+, DNA को डबल स्ट्र्यान्डहरू एकैसाथ पहिचान गर्न सकिन्छ र लगभग एउटै साइटमा क्लीभ गर्न सकिन्छ फ्ल्याट एन्ड DNA टुक्राहरू वा 1-2 न्यूक्लियोटाइडहरू फैलिएको टाँसिएको अन्तिम DNA टुक्राहरू बनाउन।
अवयवहरू
| नाम | ०.१KU | 1KU | ५ KU | ५० KU |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | १ एमएल | १० एमएल |
| 10×DNase I बफर | १ एमएल | १ एमएल | ५ × १ एमएल | ५ × १० एमएल |
भण्डारण अवस्थाहरू
-25 ℃ ~ -15 ℃ भण्डारणको लागि;आइस प्याक अन्तर्गत यातायात।
निर्देशनहरू
1. तल सूचीबद्ध अनुपात अनुसार RNase-मुक्त ट्यूबमा प्रतिक्रिया समाधान तयार गर्नुहोस्:
| कम्पोनेन्ट | भोल्युम |
| आरएनए | X µg |
| 10 × DNase I बफर | 1μL |
| DNase I, RNase-मुक्त (5U/μL) | 1 U प्रति µg RNA① |
| ddH2O | 10μL सम्म |
नोट: ① DNase I को मात्रा गणना गर्नुहोस् जुन RNA को मात्राको आधारमा थप्न आवश्यक छ।
2. 15 मिनेटको लागि 37 ℃;
3. 2.5mM ~ 5mM को अन्तिम एकाग्रतामा 0.5M EDTA थप्नुहोस्, र प्रतिक्रिया रोक्न 10 मिनेटको लागि 65℃ मा तातो गर्नुहोस्।नमूना प्रत्यक्ष रूपमा अर्को प्रतिक्रियाको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ जस्तै उल्टो ट्रान्सक्रिप्शनपरिक्षण।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइलाई इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिएको छ जसले pBR322 को 1µg पूर्ण रूपमा घटाउँछ।37 ℃ मा 10 मिनेटमा DNA।
गुणस्तर नियन्त्रण
RNase:1.6µg MS2 RNA भएको DNase I को 5U 37 ℃ मा 4 घण्टाको लागि कुनै ह्रास उत्पन्न गर्दैन।agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारित।
नोटहरू
1. कृपया 0.5MEDTA आफै तयार गर्नुहोस्।
2. RNA को प्रति µg 1U DNase I प्रयोग गर्नुहोस्।यद्यपि, यदि RNA 1µg भन्दा कम छ भने, कृपया 1U DNase I प्रयोग गर्नुहोस्।
3. अपरेशनको समयमा कृपया इन्जाइमलाई बरफमा राख्नुहोस्।
