भाइरल DNA/RNA एक्स्ट्र्याक्शन किट
यो किट उच्च शुद्धता भाइरल DNA/RNA को नमूनाहरू जस्तै nasopharyngeal swabs, वातावरणीय स्वाब्स, सेल कल्चर सुपरनेटेन्टहरू, र टिस्यु होमोजेनेट सुपरनेटेन्टहरूबाट द्रुत निकासीको लागि उपयुक्त छ।यो किट सिलिका मेम्ब्रेन शुद्धिकरण प्रविधिमा आधारित छ जसले उच्च गुणस्तरको भाइरल DNA/RNA निकाल्नको लागि फिनोल/क्लोरोफर्म अर्गानिक सॉल्भेन्ट वा समय-उपभोग गर्ने अल्कोहल वर्षाको आवश्यकतालाई हटाउँछ।प्राप्त न्यूक्लिक एसिडहरू अशुद्धताबाट मुक्त छन् र रिभर्स ट्रान्सक्रिप्शन, PCR, RT-PCR, वास्तविक-समय PCR, नेक्स्ट-जेनेरेसन सिक्वेन्सिङ (NGS), र उत्तरी ब्लट जस्ता डाउनस्ट्रीम प्रयोगहरूमा प्रयोगको लागि तयार छन्।
भण्डारण अवस्थाहरू
15 ~ 25 ℃ मा भण्डार गर्नुहोस्, र कोठाको तापक्रममा ढुवानी गर्नुहोस्
अवयवहरू
| अवयवहरू | 100RXNS |
| बफर VL | ५० एमएल |
| बफर RW | 120 मिलीलीटर |
| RNase-रहित ddH2 O | 6 मिली |
| फास्टप्योर आरएनए स्तम्भहरू | १०० |
| सङ्कलन ट्यूबहरू (2ml) | १०० |
| RNase-रहित सङ्कलन ट्यूबहरू (1.5ml) | १०० |
बफर VL:लिसिस र बाइन्डिङको लागि वातावरण प्रदान गर्नुहोस्।
बफर RW:अवशिष्ट प्रोटीन र अन्य अशुद्धता हटाउनुहोस्।
RNase-रहित ddH2O:स्पिन स्तम्भमा झिल्लीबाट एल्युट DNA/RNA।
फास्टप्योर आरएनए स्तम्भहरू:विशेष रूपमा DNA/RNA सोख्नुहोस्।
सङ्कलन ट्यूबहरू 2 एमएल:फिल्टर जम्मा गर्नुहोस्।
RNase-रहित सङ्कलन ट्यूबहरू 1.5 ml:DNA/RNA सङ्कलन गर्नुहोस्।
अनुप्रयोगहरू
Nasopharyngeal स्वाब, वातावरणीय स्वाब, सेल कल्चर सुपरनेटेन्ट, र टिस्यु होमोजेनेट सुपरनेटेन्टहरू।
आत्म-तयार मेटरials
RNase-मुक्त पिपेट टिप्स, 1.5 ml RNase-मुक्त सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, सेन्ट्रीफ्यूज, भोर्टेक्स मिक्सर, र पिपेटहरू।
प्रयोग प्रक्रिया
बायोसेफ्टी क्याबिनेटमा निम्न सबै चरणहरू पूरा गर्नुहोस्।
1. नमूनाको 200 μl RNase-रहित सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबमा थप्नुहोस् (अपर्याप्त नमूनाको अवस्थामा PBS वा 0.9% NaCl सँग बनाउनुहोस्), 500 μl Buffer VL थप्नुहोस्, 15 - 30 सेकेन्डसम्म भर्टेक्सिङ गरेर राम्ररी मिलाउनुहोस्, र सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्। छोटकरीमा ट्यूबको तल्लो भागमा मिश्रण सङ्कलन गर्न।
2. फास्टप्योर आरएनए स्तम्भहरू सङ्कलन ट्यूबहरूमा राख्नुहोस् 2 मिलीलीटर।मिश्रणलाई चरण १ बाट फास्टप्युर आरएनए स्तम्भहरूमा स्थानान्तरण गर्नुहोस्, १ मिनेटको लागि १२,००० आरपीएम (१३,४०० × ग्राम) मा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्, र फिल्टरलाई खारेज गर्नुहोस्।
3. FastPure RNA स्तम्भहरूमा 600 μl बफर RW थप्नुहोस्, 30 सेकेन्डको लागि 12,000 rpm (13,400 × g) मा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्, र फिल्टरलाई खारेज गर्नुहोस्।
४. चरण ३ दोहोर्याउनुहोस्।
5. खाली स्तम्भलाई 12,000 rpm (13,400 × g) मा २ मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्युज गर्नुहोस्।
6. FastPure RNA स्तम्भहरूलाई ध्यानपूर्वक नयाँ RNase-रहित सङ्कलन ट्यूबहरू 1.5 ml (किटमा प्रदान गरिएको) मा स्थानान्तरण गर्नुहोस्, र स्तम्भलाई नछोइकन झिल्लीको केन्द्रमा 30 - 50 μl RNase-रहित ddH2O थप्नुहोस्।कोठाको तापक्रममा १ मिनेट र सेन्ट्रीफ्यूजलाई १२,००० आरपीएम (१३,४०० × ग्राम) १ मिनेटको लागि उभिन दिनुहोस्।
7. फास्टप्योर आरएनए स्तम्भहरू खारेज गर्नुहोस्।DNA/RNA लाई सिधै पछिल्ला परीक्षणहरूको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ, वा छोटो अवधिको लागि -30~ -15°C मा भण्डारण गर्न सकिन्छ वा लामो अवधिको लागि -85 ~ -65°C मा भण्डारण गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
अनुसन्धानको लागि मात्र प्रयोग गर्नुहोस्।डायग्नोस्टिक प्रक्रियाहरूमा प्रयोगको लागि होइन।
1. नमूनाहरूलाई कोठाको तापक्रममा पहिले नै सन्तुलित गर्नुहोस्।
2. भाइरसहरू अत्यधिक संक्रामक हुन्छन्।कृपया प्रयोग गर्नु अघि सबै आवश्यक सुरक्षा सावधानीहरू लिइएको सुनिश्चित गर्नुहोस्।
3. नमूनालाई बारम्बार चिसो र पग्लनबाट जोगिनुहोस्, किनकि यसले निकालिएको भाइरल DNA/RNA को क्षय वा उत्पादन घटाउन सक्छ।
4. स्वयम्-तयार उपकरणहरूले RNase-रहित पिपेट टिप्स, 1.5 ml RNase-रहित सेन्ट्रीफ्यूज ट्यूबहरू, सेन्ट्रीफ्यूज, भोर्टेक्स मिक्सर, र पिपेटहरू समावेश गर्दछ।
5. किट प्रयोग गर्दा, प्रयोगशाला कोट, डिस्पोजेबल लेटेक्स ग्लोभ्स, र डिस्पोजेबल मास्क लगाउनुहोस् र RNase प्रदूषणको जोखिम कम गर्न RNase-रहित उपभोग्य वस्तुहरू प्रयोग गर्नुहोस्।
6. अन्यथा निर्दिष्ट नभएसम्म कोठाको तापक्रममा सबै चरणहरू गर्नुहोस्।
संयन्त्र र कार्यप्रवाह
