Bst 2.0 DNA Polymerase (Glycerol free)
Bst DNA पोलिमरेज V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I बाट लिइएको हो, जसमा 5′→3′ DNA पोलिमरेज गतिविधि र बलियो चेन प्रतिस्थापन गतिविधि छ, तर 5′→3′ exonuclease गतिविधि छैन।Bst DNA Polymerase V2 स्ट्र्यान्ड-डिस्प्लेसमेन्ट, आइसोथर्मल एम्प्लीफिकेशन LAMP (लूप मेडिएटेड आइसोथर्मल एम्प्लिफिकेशन) र द्रुत अनुक्रमको लागि उपयुक्त छ।
अवयवहरू
| कम्पोनेन्ट | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (ग्लिसरोल-मुक्त) (8U/μL) | ०.२ एमएल | १ एमएल | १० एमएल |
| 10×HC Bst V2 बफर | १.५ एमएल | २×१.५ एमएल | 3 × 10 एमएल |
| MgSO४(100mm) | १.५ एमएल | २×१.५ एमएल | 2 × 10 एमएल |
अनुप्रयोगहरू
1.LAMP समतापीय प्रवर्धन
2.DNA स्ट्र्यान्ड एकल विस्थापन प्रतिक्रिया
3. उच्च GC जीन अनुक्रमण
4. न्यानोग्राम स्तरको DNA अनुक्रमण।
भण्डारण अवस्था
ढुवानी 0°C अन्तर्गत र -25°C~-15°C मा भण्डारण गर्नुहोस्।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइलाई 65 डिग्री सेल्सियसमा 30 मिनेटमा एसिड अघुलनशील पदार्थमा 25 एनएमओएल डीएनटीपी समावेश गर्ने इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिन्छ।
गुणस्तर नियन्त्रण
1.प्रोटीन शुद्धता परख (SDS-PAGE):Bst DNA पोलिमरेज V2 को शुद्धता ≥99% कूमासी ब्लू पत्ता लगाउने प्रयोग गरेर SDS-PAGE विश्लेषणद्वारा निर्धारण गरिन्छ।
2.Exonuclease गतिविधि:1 μg λ -Hind Ⅲ डाइजेस्ट DNA को 16 घण्टाको लागि 37 ℃ मा 16 घण्टाको लागि Bst DNA पोलिमरेज V2 को न्यूनतम 8 U समावेश भएको 50 μL प्रतिक्रियाको इन्क्युबेशनले निर्धारण गरे अनुसार कुनै पनि पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
3.Nickase गतिविधि:1 μg pBR322 DNA 37°C मा 16 घण्टाको लागि Bst DNA पोलिमरेज V2 को न्यूनतम 8 U समावेश भएको 50 μL प्रतिक्रियाको इन्क्युबेशनले निर्धारण गरेबमोजिम कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
4.RNase गतिविधि:1.6 μg MS2 RNA सँग 1.6 μg MS2 RNA को न्यूनतम 8 U को Bst DNA पोलिमरेज V2 समावेश भएको 50 μL प्रतिक्रियाको इन्क्युबेशनले 37 डिग्री सेल्सियसमा 16 घण्टाको लागि निर्धारण गरे अनुसार कुनै पत्ता लगाउन सकिने ह्रास हुँदैन।
5.ई कोलाई डीएनए:Bst DNA पोलिमरेज V2 को 120 U E. coli 16S rRNA लोकसका लागि विशेष प्राइमरहरू सहित TaqMan qPCR प्रयोग गरेर E. coli genomic DNA को उपस्थितिको लागि स्क्रिन गरिएको छ।ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए प्रदूषण ≤1 प्रतिलिपि हो।
LAMP प्रतिक्रिया
| अवयवहरू | २५μL |
| 10×HC Bst V2 बफर | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mm प्रत्येक) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 हरियो (25×)a | 1.0 μL |
| प्राइमर मिश्रणb | ६ μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | १ μL |
| टेम्प्लेट | × μL |
| ddH₂O | 25 μL सम्म |
नोट:
१) क.SYTOTM 16 हरियो (25×): प्रयोगात्मक आवश्यकता अनुसार, अन्य रंगहरू विकल्पको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ;
२) ख।प्राइमर मिक्स: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB र अन्य भोल्युमहरू मिलाएर प्राप्त गरिन्छ।
प्रतिक्रिया र अवस्था
1 × HC Bst V2 बफर, इन्क्युबेशन तापमान 60°C र 65°C को बीचमा हुन्छ।
गर्मी निष्क्रियता
80 डिग्री सेल्सियस, 20 मिनेट
