अल्ट्रा न्यूक्लिज
UltraNuclease Serratia marcescens बाट व्युत्पन्न एक आनुवंशिक ईन्जिनियर गरिएको डेन्डोन्यूक्लिज हो, जसले DNA वा RNA लाई घटाउन सक्षम छ, या त डबल वा एकल स्ट्रेन्ड, रैखिक वा गोलाकार अवस्थाको विस्तृत दायरा अन्तर्गत, न्यूक्लिक एसिडलाई पूर्ण रूपमा 5'-मोनोफोस्फेट ओलिगोनसेन्स लम्बाइमा घटाउन सक्छ। ।आनुवंशिक ईन्जिनियरिङ् परिमार्जन पछि, उत्पादन किण्वित, अभिव्यक्त, र Escherichia coli (E. coli) मा शुद्ध गरिएको थियो, जसले सेल सुपरनेटान्ट र सेल lysate वैज्ञानिक अनुसन्धान को भिस्कोसिटी कम गर्छ, तर शुद्धीकरण दक्षता र प्रोटीन को कार्यात्मक अनुसन्धान पनि सुधार गर्दछ।यसलाई जीन थेरापी, भाइरस शुद्धिकरण, खोप उत्पादन, प्रोटिन र पोलिसेकराइड औषधि उद्योगमा होस्ट अवशेष न्यूक्लिक एसिड हटाउने अभिकर्मकको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।
उत्पादन सुविधाहरू
| CAS नम्बर | 9025-65-4 |
| EC नम्बर | |
| आणविक वजन | 30kDa |
| आइसोइलेक्ट्रिक पोइन्ट | ६.८५ |
| प्रोटीन शुद्धता | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| विशिष्ट गतिविधि | ≥१।1×106U/mg |
| इष्टतम तापक्रम | ३७ डिग्री सेल्सियस |
| इष्टतम pH | ८.० |
| प्रोटीज गतिविधि | नकारात्मक |
| बायोबर्डन | ~10CFU/100,000U |
| अवशिष्ट होस्ट-सेल प्रोटीन | ≤10ppm |
| भारी धातु | ≤10ppm |
| ब्याक्टेरियल एन्डोटोक्सिन | ~0.25EU/1000U |
| भण्डारण बफर | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% ग्लिसरोल |
भण्डारण अवस्थाहरू
≤0°C यातायात；-25~-15°C भण्डारण, 2 वर्षको वैधता (फ्रिजिङ-पघ्नबाट जोगिन)।
एकाइ परिभाषा
37 °C मा 30 मिनेट भित्र △A260 को अवशोषण मान 1.0 द्वारा परिवर्तन गर्न प्रयोग गरिएको इन्जाइमको मात्रा, pH 8.0, oligonucleotides मा काटेर पाचन 37μg साल्मन शुक्राणु DNA को बराबर, सक्रिय एकाइ (U) को रूपमा परिभाषित गरिएको थियो।
गुणस्तर नियन्त्रण
अवशिष्ट होस्ट-सेल प्रोटीन: एलिसा किट
•प्रोटीज अवशेषहरू: 250KU/mL UltraNuclease 60min को लागि सब्सट्रेट संग प्रतिक्रिया, कुनै गतिविधि पत्ता लागेन।
•ब्याक्टेरियल एन्डोटोक्सिन: LAL-परीक्षण, जनवादी गणतन्त्र चीनको खण्ड 4 (2020 संस्करण) जेल सीमा परीक्षण विधिको फार्माकोपिया।सामान्य नियम (1143)।
•बायोबर्डन: पिपुल्स रिपब्लिक अफ चाइनाको फार्माकोपिया भोल्युम ४ (२०२० संस्करण) - सामान्य
स्टेरिलिटी टेस्ट (1101), PRC राष्ट्रिय मानक, GB 4789.2-2016 को लागि नियम।
•भारी धातु:ICP-AES, HJ776-2015।
सञ्चालन
SDS एकाग्रता 0.1% वा EDTA भन्दा बढी हुँदा अल्ट्रान्यूक्लिज गतिविधिलाई उल्लेखनीय रूपमा रोकिएको थियो।
एकाग्रता 1mM भन्दा बढी थियो। Surfactant Triton X-100, Tween 20 र Tween 80 ले न्यूक्लिजमा कुनै प्रभाव पारेन।
गुणहरू जब एकाग्रता 1.5% भन्दा कम थियो।
| सञ्चालन | इष्टतम सञ्चालन | मान्य सञ्चालन |
| तापक्रम | 37 ℃ | ०-४५ ℃ |
| pH | ८.०-९.२ | ६.०- ११.० |
| Mg2+ | १-२ मि.मि | 1-15mm |
| DTT | 0-100mm | >100mm |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100mm | >100mm |
| मोनोभेलेन्ट धातु आयन (Na+, K+ आदि) | ०-२० मिमी | ०-२०० मिमी |
| PO43- | 0-10mm | 0-100mm |
प्रयोग र खुराक
• खोप उत्पादनहरूबाट एक्सोजेनस न्यूक्लिक एसिड हटाउनुहोस्, अवशिष्ट न्यूक्लिक एसिड विषाक्तताको जोखिम कम गर्नुहोस् र उत्पादन सुरक्षा सुधार गर्नुहोस्।
• न्यूक्लिक एसिडको कारणले हुने फिड तरल पदार्थको चिपचिपापन घटाउनुहोस्, प्रशोधन गर्ने समय छोटो पार्नुहोस् र प्रोटिनको उपज बढाउनुहोस्।
• र्याप गरिएको कण (भाइरस, इन्क्लुजन बडी, इत्यादि) न्यूक्लिक एसिड हटाउनुहोस्, जुन अनुकूल छ।
कण को रिलीज र शुद्धीकरण को लागी।
| प्रयोगात्मक प्रकार | प्रोटिन उत्पादन | भाइरस, भ्याक्सिन | सेल ड्रग्स |
| कक्ष संख्या | 1g सेल भिजेको वजन (10ml बफर संग पुन: निलम्बित) | 1L किण्वन तरल supernatant | 1L संस्कृति |
| न्यूनतम खुराक | 250U | 100U | 100U |
| सिफारिस गरिएको खुराक | 2500U | 25000U | 5000U |
• न्यूक्लिज उपचारले स्तम्भ क्रोमेटोग्राफी, इलेक्ट्रोफोरेसिस र ब्लटिंग विश्लेषणको लागि नमूनाको रिजोल्युसन र रिकभरी सुधार गर्न सक्छ।
• जीन थेरापीमा, शुद्ध एडिनो-सम्बन्धित भाइरसहरू प्राप्त गर्न न्यूक्लिक एसिड हटाइन्छ।
