रोबस्टार्ट Taq DNA पोलिमरेज
रोबस्टार्ट टाक डीएनए पोलिमरेज एक हट स्टार्ट डीएनए पोलिमरेज हो।यो उत्पादनले PCR प्रणालीको तयारी र प्रवर्धनको प्रक्रियामा प्राइमर वा प्राइमर एग्रीगेसनको गैर-विशिष्ट एनिलिङको कारणले गर्दा हुने गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियालाई राम्रोसँग रोक्न सक्दैन।तसर्थ, यो उत्कृष्ट विशिष्टता छ र कम एकाग्रता टेम्प्लेट को प्रवर्धन को लागी अधिक प्रभावकारी छ, र यो मल्टिप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रिया को लागी उपयुक्त छ।यसबाहेक, यो उत्पादनसँग धेरै राम्रो प्रयोज्यता छ, र स्थिर प्रवर्धन परिणामहरू विभिन्न प्रकारका PCR प्रतिक्रियाहरूमा प्राप्त गर्न सकिन्छ।
अवयवहरू
1.5 U/μL रोबस्टार्ट Taq DNA पोलिमरेज
2.10 × PCR बफर II (Mg²+ नि:शुल्क) (वैकल्पिक)
3.२५ एमएम एमजीसीएल2(वैकल्पिक)
* 10 × PCR बफर II (Mg²+ फ्री) मा dNTP र Mg²+ समावेश छैन, कृपया dNTPs र MgCl थप्नुहोस्।2प्रतिक्रिया प्रणाली तयार गर्दा।
सिफारिस गरिएका आवेदनहरू
1.द्रुत प्रवर्धन।
2.बहु प्रवर्धन।
3.रगत, स्वाब, र अन्य नमूनाहरूको प्रत्यक्ष प्रवर्धन।
4.श्वासप्रश्वाससम्बन्धी रोगहरूको पहिचान।
भण्डारण अवस्था
-20 डिग्री सेल्सियस लामो अवधिको भण्डारणको लागि, प्रयोग गर्नु अघि राम्ररी मिलाउनु पर्छ, बारम्बार फ्रिज-थउबाट बच्न।
*यदि रेफ्रिजरेसन पछि वर्षा हुन्छ भने, यो सामान्य छ;यो मिश्रण र प्रयोग गर्नु अघि कोठाको तापक्रममा सन्तुलन गर्न सिफारिस गरिन्छ।
एकाइ परिभाषा
एक सक्रिय इकाई (U) लाई टेम्प्लेट/प्राइमरको रूपमा सक्रिय साल्मन स्पर्म DNA प्रयोग गरी 30 मिनेटको लागि एसिड-अघुलनशील पदार्थमा 10 nmol deoxyribonucleotide को एसिड-अघुलनशील पदार्थमा समावेश गर्ने इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिन्छ।
गुणस्तर नियन्त्रण
1.SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेटिक शुद्धता 98% भन्दा बढी।
2.प्रवर्धन संवेदनशीलता, ब्याच-देखि-ब्याच नियन्त्रण, स्थिरता।
3.एक्सोजेनस न्यूक्लिज गतिविधि छैन, एक्सोजेनस एन्डोन्यूक्लिज वा एक्सोन्यूक्लिज प्रदूषण छैन
निर्देशनहरू
प्रतिक्रिया सेटअप
| अवयवहरू | मात्रा (μL) | अन्तिम एकाग्रता |
| 10 × PCR बफर II (Mg²+ नि:शुल्क)a | 5 | १× |
| dNTPs (10mm प्रत्येक dNTP) | 1 | 200 μM |
| २५ एमएम एमजीसीएल2 | २-८ | 1-4 मिमी |
| रोबस्टार्ट Taq DNA पोलिमरेज (5U/μL) | ०.२५-०.५ | 1.25-2.5 U |
| 25 × प्राइमर मिक्सb | 2 | १× |
| टेम्प्लेट | - | 1 μg/प्रतिक्रिया |
| ddH2O | ५० सम्म | - |
नोट:
१) क.बफरमा dNTP र Mg²+ समावेश छैन, कृपया dNTP र MgCl थप्नुहोस्2प्रतिक्रिया प्रणाली तयार गर्दा।
२) ख।यदि qPCR/qRT-PCR को लागि प्रयोग गरिन्छ भने, फ्लोरोसेन्ट प्रोबहरू प्रतिक्रिया प्रणालीमा थपिनुपर्छ।सामान्यतया, ०.२ μM को अन्तिम प्राइमर एकाग्रताले राम्रो परिणाम दिनेछ;यदि प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब छ भने, प्राइमर एकाग्रता 0.2-1 μM को दायरामा समायोजित गर्न सकिन्छ।प्रोब एकाग्रता सामान्यतया 0.1-0.3 μM को दायरामा अनुकूलित हुन्छ।प्राइमर र प्रोबको उत्तम संयोजन फेला पार्न एकाग्रता ग्रेडियन्ट प्रयोगहरू गर्न सकिन्छ।
थर्मल साइकल चलाउने प्रोटोकल
| नियमित पीसीआरप्रक्रिया | |||
| चरण | तापक्रम | समय | साइकलहरू |
| प्रि-डिनेचरेशन | 95 ℃ | १-५ मिनेट | 1 |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | 10-20 सेकेन्ड | 40-50 |
| एनिलिङ / विस्तार | ५६-६४ ℃ | 20-60 सेकेन्ड | |
| छिटो पीसीआरप्रक्रिया | |||
| चरण | तापक्रम | समय | साइकलहरू |
| प्रि-डिनेचरेशन | 95 ℃ | ३० सेकेन्ड | 1 |
| विकृतीकरण | 95 ℃ | १-५ सेकेन्ड | ४०-४५ |
| एनिलिङ / विस्तार | ५६-६४ ℃ | 5-20 सेकेन्ड | |
नोटहरू
1.द्रुत DNA पोलिमरेजको प्रवर्धन दर 1 kb/10 s भन्दा कम हुनु हुँदैन।तापक्रम वृद्धि र पतन दर, तापक्रम नियन्त्रण मोड र विभिन्न PCR उपकरणहरूको ताप प्रवाह दक्षता धेरै भिन्न हुन्छ, त्यसैले विशिष्ट छिटो PCR उपकरणको लागि इष्टतम प्रतिक्रिया अवस्थाहरू अनुकूलन गर्न सिफारिस गरिन्छ।
2.प्रणाली उच्च विशिष्टता र संवेदनशीलता संग, उच्च अनुकूलन योग्य छ।
3.उच्च संवेदनशीलता पीसीआर पत्ता लगाउने अभिकर्मकहरूको रूपमा प्रयोगको लागि उपयुक्त, र मल्टिप्लेक्स पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रियाहरूमा प्रयोग गर्न सकिन्छ।
4.5′→3′ पोलिमरेज गतिविधि, 5′→3′ exonuclease गतिविधि;कुनै 3′→5′ exonuclease गतिविधि;कुनै प्रूफरीडिङ प्रकार्य छैन।
5.PCR र RT-PCR को गुणात्मक र मात्रात्मक परीक्षणको लागि उपयुक्त।
6.PCR उत्पादनको 3′ छेउ A हो, जसलाई सीधै T भेक्टरमा क्लोन गर्न सकिन्छ।
7.तीन-चरण विधि कम एनेलिङ तापक्रम भएका प्राइमरहरू वा 200 bp भन्दा लामो टुक्राहरूको प्रवर्धनको लागि सिफारिस गरिन्छ।
