DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) एक endodeoxyribonuclease हो जसले एकल- वा डबल-स्ट्र्यान्ड DNA पचाउन सक्छ।यसले 5′-टर्मिनलमा फस्फेट समूहहरू र 3′-टर्मिनलमा हाइड्रोक्सिलको साथ मोनोडिओक्सिन्युक्लियोटाइडहरू वा एकल- वा डबल-स्ट्र्यान्डेड ओलिगोडिओक्साइन्यूक्लियोटाइडहरू उत्पादन गर्न फस्फोडिएस्टर बन्डहरूलाई पहिचान र क्लीभ गर्छ।DNase I को गतिविधि Ca2+ मा निर्भर गर्दछ र Mn2+ र Zn2+ जस्ता divalent धातु आयनहरू द्वारा सक्रिय गर्न सकिन्छ।5mM Ca2+ ले इन्जाइमलाई हाइड्रोलिसिसबाट बचाउँछ।Mg2+ को उपस्थितिमा, इन्जाइमले DNA को कुनै पनि स्ट्र्यान्डमा कुनै पनि साइटलाई अनियमित रूपमा चिन्न र क्लिभ गर्न सक्छ।Mn2+ को उपस्थितिमा, DNA को डबल स्ट्र्यान्डहरू एकैसाथ पहिचान गर्न सकिन्छ र लगभग एउटै साइटमा क्लीभ गर्न सकिन्छ फ्ल्याट एन्ड DNA टुक्राहरू वा 1-2 न्यूक्लियोटाइडहरू फैलिएको टाँसिएको अन्तिम DNA टुक्राहरू बनाउन।
उत्पादन सम्पत्ति
बोवाइन प्यान्क्रियाज DNase I खमीर अभिव्यक्ति प्रणालीमा व्यक्त गरिएको थियो र शुद्ध गरिएको थियो।
Cघटकहरू
| कम्पोनेन्ट | भोल्युम | |||
| ०.१KU | 1KU | 5KU | ५०KU | |
| DNase I, RNase-मुक्त | 20μL | 200μL | १ एमएल | १० एमएल |
| 10×DNase I बफर | १ एमएल | १ एमएल | ५ × १ एमएल | ५ × १० एमएल |
यातायात र भण्डारण
1. भण्डारण स्थिरता: - भण्डारणको लागि 15℃~-25℃;
2. यातायात स्थिरता: बर्फ प्याक अन्तर्गत यातायात;
3. मा आपूर्ति गरिएको: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% ग्लिसरोल, pH 7.6 मा 25℃।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइलाई इन्जाइमको मात्राको रूपमा परिभाषित गरिएको छ जसले 1 µg pBR322 DNA को 10 मिनेटमा 37 डिग्री सेल्सियसमा पूर्ण रूपमा घटाउँछ।
गुणस्तर नियन्त्रण
RNase:1.6 μg MS2 RNA को साथ 37 ℃ मा 4 घण्टाको लागि DNase I को 5U ले एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार कुनै गिरावट उत्पन्न गर्दैन।
ब्याक्टेरियल इन्डोटोक्सिन:LAL-परीक्षण, चिनियाँ फार्माकोपिया IV 2020 संस्करण अनुसार, जेल सीमा परीक्षण विधि, सामान्य नियम (1143)।ब्याक्टेरियल एन्डोटक्सिन सामग्री ≤10 EU/mg हुनुपर्छ।
प्रयोगको लागि निर्देशनहरू
1. तल सूचीबद्ध अनुपात अनुसार RNase-मुक्त ट्यूबमा प्रतिक्रिया समाधान तयार गर्नुहोस्:
| कम्पोनेन्ट | भोल्युम |
| आरएनए | X μg |
| 10 × DNase I बफर | १ μL |
| DNase I, RNase-मुक्त (5U/μL) | 1 U प्रति μg RNA |
| ddH2O | 10 μL सम्म |
15 मिनेटको लागि 2.37 ℃;
3. प्रतिक्रिया रोक्न समाप्ति बफर थप्नुहोस्, र DNase I निष्क्रिय गर्न 10 मिनेटको लागि 65 ℃ मा तातो गर्नुहोस्। नमूना सीधै अर्को ट्रान्सक्रिप्शन प्रयोगको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ।
नोटहरू
1. प्रति μg RNA को 1U DNase I प्रयोग गर्नुहोस्, वा RNA को 1μg भन्दा कमको लागि 1U DNase I प्रयोग गर्नुहोस्।
2. EDTA लाई 5 mM को अन्तिम एकाग्रतामा थपिनु पर्छ RNA लाई इन्जाइमको निष्क्रियताको समयमा घट्नबाट जोगाउन।
