BspQI
BspQI लाई E. coli मा पुन: संयोजक रूपमा व्यक्त गर्न सकिन्छ जसले विशिष्ट साइटहरू पहिचान गर्न सक्छ र अन्तर्गत उत्पादन गरिन्छ।
BspQI, एक IIs प्रतिबन्ध endonuclease प्रतिबन्ध endonuclease, एक पुन: संयोजक E. कोलाई स्ट्रेनबाट व्युत्पन्न गरिएको हो जसले ब्यासिलस स्फेरिकसबाट क्लोन र परिमार्जित BspQI जेन बोक्छ।यसले विशिष्ट साइटहरू पहिचान गर्न सक्छ, र पहिचान अनुक्रम र क्लीभेज साइटहरू निम्नानुसार छन्:
५' · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · ·
३' · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · ५'
उत्पादन सुविधाहरू
1. उच्च गतिविधि, छिटो पाचन;
2. कम तारा गतिविधि, "स्केलपेल" जस्तै सही काट्ने सुनिश्चित गर्दै;
3. बिना BSA र पशु-मूल मुक्त;
मेथिलेसन संवेदनशीलता
Dम मेथिलेसन:संवेदनशील छैन;
Dसेमी मिथाइलेशन:संवेदनशील छैन;
CpG मेथिलेसन:संवेदनशील छैन;
भण्डारण अवस्थाहरू
उत्पादन पठाइनु पर्छ ≤ 0℃;-25 ~ - 15 ℃ अवस्थामा भण्डार गर्नुहोस्।
भण्डारण बफर
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml पुनः संयोजक अल्बुमिन, 0. 1% Trition X- 100 र 50% ग्लिसरोल (pH 7.0 @ 25°C)।
एकाइ परिभाषा
एक एकाइलाई 1µg आन्तरिक नियन्त्रण DNA को 1 घण्टामा 50°C मा 50 μL को कुल प्रतिक्रिया मात्रामा पचाउन आवश्यक इन्जाइमको मात्रा भनेर परिभाषित गरिन्छ।
गुणस्तर नियन्त्रण
प्रोटिन शुद्धता परख (SDS-PAGE):BspQI को शुद्धता SDS-PAGE विश्लेषण द्वारा निर्धारित ≥95% थियो।
RNase:BspQI को 10U 1.6μg MS2 RNA सँग 4 घण्टाको लागि 50 ℃ मा एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरिए अनुसार कुनै गिरावट उत्पन्न गर्दैन।
गैर-विशिष्ट DNase गतिविधि:BspQI को 10U 1μg λ DNA को साथ 50℃ मा 16 घण्टाको लागि, 50℃ को 1 घण्टाको तुलनामा, agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा निर्धारण गरे अनुसार कुनै अतिरिक्त DNA उत्पादन गर्दैन।
लिगेशन र रिकटिंग:10U BspQI सँग 1 μg λDNA को पाचन पछि, DNA टुक्राहरू T4 DNA ligase 16ºC मा बाँधिएको हुन सक्छ।र यी बाँधिएका टुक्राहरू BspQI को साथ पुन: काट्न सकिन्छ।
ई कोलाई DNA: E. coli 16s rDNA-विशिष्ट TaqMan qPCR पत्ता लगाउने देखाइएको छ कि E.coli जीनोम अवशेष ≤ 0.1pg/ul।
होस्ट प्रोटीन अवशेष:≤ 50 पीपीएम
ब्याक्टेरियल इन्डोटोक्सिन: LAL-परीक्षण, चिनियाँ फार्माकोपिया IV 2020 संस्करण अनुसार, जेल सीमा परीक्षण विधि, सामान्य नियम (1143)।ब्याक्टेरियल एन्डोटक्सिन सामग्री ≤10 EU/mg हुनुपर्छ।
प्रतिक्रिया प्रणाली र सर्तहरू
| कम्पोनेन्ट | भोल्युम |
| BspQ I(10 U/μL) | १ μL |
| DNA | 1 μg |
| १० x BspQ I बफर | ५ μL |
| dd H2O | 50 μL सम्म |
प्रतिक्रिया अवस्था: 50 ℃, १~ १६ घन्टा।
तातो निष्क्रियता: 20 मिनेटको लागि 80 डिग्री सेल्सियस।
सिफारिस गरिएको प्रतिक्रिया प्रणाली र अवस्थाहरूले अपेक्षाकृत राम्रो इन्जाइम पाचन प्रभाव प्रदान गर्न सक्छ, जुन सन्दर्भको लागि मात्र हो, कृपया विवरणहरूको लागि प्रयोगात्मक परिणामहरू हेर्नुहोस्।
उत्पादन आवेदन
प्रतिबन्ध endonuclease पाचन, द्रुत क्लोनिंग।
नोटहरू
1. इन्जाइमको मात्रा ≤ प्रतिक्रियाको मात्राको 1/10।
2. ग्लिसरोल एकाग्रता 5% भन्दा बढी हुँदा तारा गतिविधि हुन सक्छ।
3. सिफारिस गरिएको अनुपात भन्दा तल सब्सट्रेट हुँदा क्लीभेज गतिविधि हुन सक्छ।
